• Forum - Plaque, ADN, ARN

[Biologie Moléculaire] qPCR

Si on veut amplifier d'une part de l'ADN et d'autre part de l'ARN, serait-il envisageable de n'utiliser qu'une seule plaque PCR. de faire l'étape de rétro transcription sur la plaque entière (avec la rétro-transcriptase seulement dans les puits avec ARN) et ensuite faire l'étape d'amplification sur la totalité de la plaque.  [...] Oui c'est possible, Applied Biosystem (entre autre) vend un kit qui permet de faire la RT et la qPCR dans la foulee. Par contre melanger sur une plaque de l'ADN et de l'ARN ca c'est pas terrible... tu risques d'avoir des contaminations ADN a la pelle.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique PIFE + fluroscence

Du coup la PIFE serait une méthode quantitative avec une bonne sensibilité et la technique de fluorescence sur plaque 96 puits serait donc moins sensible. Par contre avec cette technique (96 puits) on peut quand même quantifier la fluorescence pour en déterminer l'interaction d'une protéine vis à vis d'un ARN ou ça reste une méthode qualitative.  [...] Sinon l'autre méthode, ce serait de fixer au fond d'une plaque des protéines et d'y ajouter des ARN marqués avec un fluorochrome. Si il y a interaction de l'ARN avec la protéine alors normalement il devrait il y aura une fluorescence. Du coup ma question c'est.  [...]

PCR sur pseudomonas aeruginosa

De plus, mes PCR marchent de temps en temps et j'utilise une taq que l'on fait et que l'on traite nous-même à la DNase pour éviter d'avoir de l'ADN de E.coli, bactérie proche de Pseudomonas pour ces marqueurs. Le soucis, c'est que mes ADN sont très bien amplifiés juste après l'extraction mais, qu'un ou deux mois après, les réactions PCR sont plus faibles voire inexistantes, comme si l'ADN s'était déterioré, alors qu'on le conserve à -20°C. D'où mon désarroi.  [...] - je travaille à partir d'une plaque-mère d'ADN dans laquelle je ne distribue que 100microlitres de dilutions d'ADN. je ne sort donc à chaque fois que cette plaque et mes dilutions et ADN purifiés restent sagement à -20°C et n'en sortent que très rarement (à moins qu'ils s'organisent des petites soirées quand je ne suis pas là.. lol).  [...]

[Biologie Cellulaire] Nucléole, reticulum endoplasmique, appareil de Golgi

et aussi savoir si leurs fonctions sont liées ensembles car si j'ai bien compris je crois que le nucléole lui synthétise l'ARN ribosomial le réticulum granuleux il synthéthise les protéines, et l'appareil de golgi les radicaux sucrés pour les macromolécules enfin je suis un peu perdue.  [...] merci beaucoup mais alors pourquoi le reticulum endoplasmique granuleux est accolé à la membrane nucléaire cela a t-il un lien avec l'ARN r synthétisé par le nucléole ou je suis a coté de la plaque.  [...]

division cellulaire

Aprés la réplication, l' adn est décondensé, il est impossible de pratiquer un mitose sur de l' adn décomdenser, lors de la profase l' adn se condense, et on voi l'apparition de duseau mitodique, qui ne serviron que dans l'anaphase, vien ensuite la methaphase la condensation est maximal, les chromosome forme un lot au millieu de la cellule appelé plaque équatorial, lors de l'anaphase les chromosome se  [...] de la mitose est caractérisé par la télophase, l' adn au pole de la cellule mere se décondence et se fait entourer d'une membrane nucleaire.  [...] Aprés la réplication, l' adn est décondensé, il est impossible de pratiquer un mitose sur de l' adn décomdenser, lors de la profase l' adn se condense, et on voi l'apparition de duseau mitodique, qui ne serviron que dans l'anaphase, vien ensuite la methaphase la condensation est maximal, les chromosome forme un lot au millieu de la cellule appelé plaque équatorial, lors de l'anaphase les chromosome se casse au niveau de leur centromere pour ne former plus qu'un chromosome seul ou a une chromatide, grace au fuseau mittique les chromosome mono chromatique vont ainsi migrer au pole de la cellule la fin de la mitose est caractérisé par la télophase,  [...]

electroporation

Et enfin, comme pour une électrophorèse sur plaque, l'ADN est une molécule chargée qui migre en fonction du courant en traversant un milieu - le gel d'électrophorèse ou présentement des cellules de levure.  [...] Donc le courant électrique attire les charges qui maintenait le potentiel de repos de la membrane a l'équilibre et l'attraction crée temporairement des pores dans la membrane.   [...]

[Microbiologie] phages à ADN et ARN

Les phages à ADN ont une symétrie double c'est à dire qu'ils ont une queue (protéine en ressort) et une tête (capside) dans laquelle se trouve l'ADN bicaténaire. Les phages reconnaissent les LPS (lypopolysacharides) des bactéries (Gram- dans ce cas) et s'y fixent grâce aux spicules présents sur la plaque d'assemblage (sous la protéine hélicoidale, là ou sont placés les fibres caudales).  [...] De plus, tu as des virus avec des tas de variantes de ADN/ARN. En effet, tu peux avoir ADN double brin ou simple brin, ARN double brin, ARN -, ARN +,  [...]

La caryogamie

La caryogamie des Mammifères est particulière car les pronucli mâle et femelle ne fusionnent pas. le pronucleus mâle double sa quantité d'ADN ainsi que le pronucléus femelle. Parallèlemment à cela, les des deux pronucléus s'intriquent l'un dans l'autre sans échanger de matiériel génétique.  [...] Ensuite, les chromosomes des deux pronucléi se mélangent mais sur la plaque métaphasique.. En effet, les pronucléi mâle et femelle, chez les Mammifères, doublent leur quantité d'ADN avant la fusion car la caryogamie débute par une mitose.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

Tu peux également fixer tes cellules et réaliser une immunofluorescence à l'aide d'Ac anti-tubuline ou anti-microtubules par exemple et faire sur ces même lames une coloration de l'ADN àl'Iodure de Propidium. De cette manière tu pourras observer l'organisation du cytosquelette au cours des différentes phases et la condensation de l'ADN ainsi que sa migration au niveau de la plaque équatoriale et sa séparation entre les 2 cellules filles.  [...] Donc ma question est comment on peut intercaler de l'adn avec de liodure de propidium dans des cellules vivantes qui ont une membrane plasmique intact, pour étudier le cycle cellulaire notamment..On lyse la membrane avant et on analyse la fluoresecence de l'ADN c'est ca sinon je ne vois pas comment vu qu'il ne traverse pas la membrane plasmique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

pour vous donnez plus de détails je réalise sur une même plaque la PCR d'un même ADN mais différents primers dans chaque puit donc différents exons et pour ces 2 ADN j'ai certains exons qui n'ont pas été amplifiés j'ai refais la PCR une 2ème fois pour ceux qui n'ont pas marché le même problème persiste j'ai certains qui ont donné et d'autres non.  [...] -mon ADN n'était pas propre comme le tien, il y a sans doute des inhibiteurs, et plus ton amplicon est long et moins il y a de chance que la PCR fonctionne. est ce que les amplicons, pour les PCR qui fonctionnent sur ces 2 adn, sont moins longs qui ceux qui ne marchent pas.  [...]