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[Biologie Cellulaire] Différence entre formaldéhyde et paraformaldéhyde pour la fixation de cellule ?

Différence entre formaldéhyde et paraformaldéhyde pour la fixation de cellule.  [...] J'aimerai savoir quelles sont les différences fondamentales entre le formaldéhyde et le paraformaldéhyde lors de la fixation de cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] fixation au paraformaldéhyde

Voilà, je dois fixer au paraformaldéhyde 4% des cellules adhérentes sur lamelles afin de faire par la suite de l'immunofluorescence, mon problème est que je ne pourrai pas faire le marquage à la suite de la fixation.  [...] Même réponse que Biocell. J'ajouterai juste qu'en les gardant comme ça dans le PBS, j'ai observé que les cellules ont tendance à être plus perméables (étape de perméabilisation à adapter).  [...]

fixation des cellules

Je voudrais savoir ce qui se passe dans les cellules du point de vue chimique lors de leur fixation avec du PFA (paraformaldéhyde) et avec du méthanol.  [...] La méthode de fixation par la formaldéhyde va créer des ponts entre les protéines ce qui permet une conservation de la localisation. De plus les lipides ne sont pas solubilisés. C'est pour cette raison qu'il faut perméabiliser tes membranes avant de faire une manip d'immuno par exempl.  [...]

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Le Mitotracker nécessite une optimisation de sa concentration car il a tendance à marquer aussi d'autres structures cellulaires, donc un risque de fausse interprétation. Un marqueur de la mitochondrie beaucoup plus spécifique et permettant une localisation des mitochondries plus résolue est un marquage anti-Hsp60.  [...] Merci Greg pour le détail du protocole. Dès que mes petites cellules auront décidées de se laisser transfecter je le testerai... J'ai hate de voir si ca a fonctionné.  [...]

[histologie] Problème de microscopie...

+ Dans quelles conditions est ta collègue, et que veut-elle faire de ses échantillons par la suite Si c'est juste pour de la morpho, une bonne fixation glutaraldéhyde donnera à priori des résultats encore meilleurs que le formaldéhyde.  [...] Ce tampon servira à dissoudre le fixateur. Effectivement YannB, a raison le glutaraldehyde (0,25-1% v.v) est un excellent fixateur, mais attention il presente une tres forte autofluorescence vert-jaune. Donc à utiliser que pour faire de la microscopie à lumiere blanche.  [...]

Immunohisto

Le premier, lors de la fixation et de l'inclusion dans la paraffine est l'incubation dans le PFD (Paraformaldéhyde) quelqu'un sait-il à quoi sert cette étape exactement.  [...] Le paraformaldehyde (PFA) sert a fixer ton echantillon. C'est un fixateur chimique, un agent pontant, qui va creer des liens covalents entre les proteines en particulier entre les amines libres. L'interet est multiple. 1-l'echantillon, le tissu, reste dans l'etat ou tu l'a fixe l'histologie et la cytologie sont conserves, 2-il n'y a plus degradation des elements cellulaires donc les antigenes a detectes sont preserves, 3-le tissus peut etre plus facile a couper si tu le fixe avant la coupe.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'immuno-marquage

en lisant un article sur le protocole d'immuno-marquage, j'ai trouvé qu'ils utilisaient le NH4Cl après une fixation au PFA (paraformaldéhyde), et que le rôle du NH4Cl est de neutraliser l'action du PFA,  [...] Non, il ne s'agit pas de neutralisation du pH ici mais de la molécule de formaldéhyde, cad que l'ammonium va réagir avec le formaldéhyde pour donner sans doute de la méthylèneimine ( figure 2 ) ou de la méthylamine ( figure 3 ). Je ne sais pas vraiment où s'arrête la réaction en fait. Tout dépend du pH de ton milieu je pense.   [...]

[Biologie Cellulaire] [histologie] Inclusion pour coupe histologique

Comme on a affaire à de toutes petites structures molles et fragiles, la technique est de les inclure d'abord dans de l'agar (supplémenté en formaldéhyde), puis de passer le tout dans des bains successifs de plus en plus concentrée en éthanol (1 heure à 70%, 1h à 80 et une à 100%) avant de passer au phénol, pour ensuite inclure dans la paraffine.   [...] Tu peux fixer paraformaldehyde 4% à 4°C pendant 30-1h. Pour de petits organes comme ca c'est tres rapide. Tu peux aussi tenter la formaline ou le boin. Là tu fixerait à temperature ambiente pendant quelques heures (c'est un peu plus lent). L'interet d'une telle fixation est que ca va te preserver tes structures en les durcissant.  [...]

[Biochimie] formol ds les labos :sos:

Par contre il était vraiment question d'équilibre entre deux formes de formaldehyde et de dilution 30 minutes avant fixation mais impossible de retrouver cet article.  [...] Par contre le paraformaldehyde est effectivement une solution de polymère de formaldehyde, aussi utilisé comme fixateur (typiquement 4%).  [...]

[Biologie Cellulaire] Perméabilisation cellulaire

La manip fait intervenir du paraformaldéhyde pour fixer les cellules, puis du Triton X pour perméabiliser les membranes. On ajoute ensuite les anticorps un à un... etc.  [...] Le PFA contient 2 fonctions alcool et n'est donc pas susceptible de former des bases de Schiff (à moins qu'il ne puisse se déprotonner dans du PBS ). De toute façon, j'imagine que ma solution est constituée de formaldéhyde et non de PFA.   [...]