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[Biochimie] séparation des proteines par Electrofocalisation

je suis en 1er année de medecine, j'aimerai savoir si, quand on parle de séparation des proteines par éléctrofocalisation, on parle seulement de procédés qui mettent en jeux la charge, càd soit la chromatographie d'échange d'ion ou l' electrophorese Bi-dimensionnelle, ou si on parlait aussi de l'electrophorese monodimensionnelle càd sds-page sachant que cette méthode ne joue que sur la taille de la proteine.  [...] Non, le SDS-Page n'a rien a voir avec la charge, puisque par définition on migre en s'affranchissant de la charge des protéines.  [...]

séparations de protéines

Si tu cherches seulement à mettre en évidence la présence de ces protéines dans ta solution, le SDS page est la méthode de choix.  [...] Si tu veux ensuite étudier ces protéines notamment sur le plan fonctionnel, tu as besoin d'une méthode non destructive ce qui élimine le SDS-page. A ma connaissance, il n'existe aucune technique non destructive capable de séparer des protéines de poids aussi proches.  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

j'étudie la capacité de renaturation (qui semble se faire de manière spontanée) de deux protéines, et j'utilise l'électrophorèse SDS-PAGE comme méthode d'analyse.  [...] Je fais migrer mes fractions sur un gel SDS-PAGE 15%, la migration ne migre pas droite par rappport à mon marqueur de taille, j'ai des trop grosse bande (non du à la quantité de protéine déposée) qui déborde c'est assez bizzarre auriez-vous une solution à mon soucis.  [...]

[Biochimie] Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-PAGE

Alors je pense que c'est plutôt une histoire de vocabulaire, mais pour prouver la localisation de la protéine dont ils étudient l'adressage, les auteurs parlent toujours de tester l'activité spécifique de SodA par SDS-PAGE ou autres techniques d'électrophorèse.  [...] Ce que je comprend pas c'est le lien entre activité spécifique et électrophorèse. L'électrophorèse en sds-page permet de séparer les protéines selon leur taille et donc d'identifier des protéines dans des extrait donnés, mais quel rapport avec l'activité spécifique de la protéine serait-ce simplement le fait que comme ils on des préparation périplasmique pure de contamination et qu'il test la présence de la protéine SodA dans ce compartiment qu'ils appellent ça activité spécifique du périplasme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Phosphorylation sur tyrosine => dégradation par protéasome???

Désolé de continuer sur le hors-sujet mais qu'appelez-vous phosphorylation in vivo Quelles méthodes pour l'évaluer Western sur la protéine cible avec un anticorps dirigé contre un phosphoépitope généré par la kinase Surexpression de la kinase, incubation brève avec P32, immunoprécipitation de la cible, gel SDS-PAGE puis autoradiographie Inversement avec surexpression de la cible,  [...] La démonstration qu'une protéine est phosphorylée, doit s'appuyer sur un ensemble de manipes qui vont dans le même sens. Ces manipes doivent être réalisées dans des systèmes différents avec des techniques et des tactiques d'approches différentes de sorte qu'en regroupant l'ensemble des résultats on puisse affirmer que la protéine en question est phosphorylée, mais ceci est valable pour n'importe quelle question scientifique.  [...]

[Biochimie] éléctrophorèse bidimentionnelle et Phi

ma question concerne la 2-D éléctrophorèse. je sais que dans cette méthode permet les protéines sont séparées en premier lieu par leur point isoélectrique et dans un second temps par leur masse (SDS PAGE).  [...] Le gel 1, séparation en fonction du point isoélectrique, comporte un gradient de pH fixé sur l'acrylamide du gel, par exemple pH 3-10. Le gel (4X d'acrylamide/bis acrylamide) ne permet pas la séparation des protéines en fonction de leur taille du fait de la faible concentration en acrylamide.  [...]

[Biochimie] glycine

Dans le gel de resolving, la vitesse de migration des ions glycinates augmente dans le gel de séparation, car le pH du gel de séparation est de 8.8, donc les protéines sont moins rapides que les ions porteurs. Les protéines se font dépasser par les ions glycinates et les différents complexes protéines-SDS se séparent grâce aux pores du gel.  [...] Si le papier SDS-PAGE est tant cite c'est surtout parce que le tampon de depot des proteines dans un gel (quel qu'il soit) est le tampon laemmli. Les articles citent en fait la composition du tampon, plus que la methode de SDS-PAGE.  [...]

[Biochimie] purification poids moléculaire

bonjour. Je puriife une protéine, mais c'est étrange, car même purifiée, en gel filtration j'ai 2 pics (l'un à env 300kDa, l'autre à env 185kDa). Pour les 2 pics j'ai aussi 2 bandes en SDS-PAGE. J'ai un peu de mal à l'interprêter je dois dire.  [...] Mais je propose, et j'attends vos commentaires, que les 2 bandes en SDS-PAGE soient en fait la même protéine avec un légère différence (post-traductionnelle), et donc j'aurais un homotétramère.  [...]

Déterminer état de dimérisation d'une protéine

Dans les techniques courants d'analyse biochimique (je termine un master en chimie, donc mes connaissances dans ce domaine sont limitées) je ne vois pas ce qui pourrait donner cette info... Une SDS dénaturant la protéine ne peut donner cette info. Une masse spectre donne des ions moléculaires, mais dans le cas de protéine les liaisons inter-protéine sont conservées J'ai des doutes.  [...] Il suffit de faire une droite de calibration avec des protéines (monomériques) dont le MW est connu. On met le MW en fonction du temps d'élution et on regarde à quel MW correspond le temps d'élution de notre protéine. On peut alors savoir de quel oligomère il s'agit.  [...]

[Biochimie] solubilité protéine, un beau SDS-PAGE

Comme c'est un premier test, je me suis placé dans des conditions classique de mon labo concernant l'induction. J'ai attendu d'être dans une DO600 de 0.6-0.8 pour induire à l'IPTG (4h). J'ai récolté les surnageants et culots juste avec l'induction à l'IPTG, et après 4h.   [...] Tout simplement tu lyses tes bactéries au sonicateur, tu doses les protéines du lysat et ainsi tu peux déposer à quantité égale en protéines.  [...]