• Forum - Organique, ARN, Phase aqueuse

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai bien compris cela, mais en quoi l'ARN est différent de l'ADN puisque j'ai trois phases au final. la phase organique, rose contenant les protéines, la phase aqueuse contenant l'ARN et au milieu, la phase intermédiaire qui correspond à l'anneau d'ADN.  [...] J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant présent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Je prépare des TP de biologie moleculaire à la fac, dont un sur l'extraction des ARN. Après avoir extrait l'ARN des cellules avec du TRIZOL, on obtient 2 phases, la phase organique (phase inferieure avec phénol et chloroforme) et une phase aqueuse avec les ARN.  [...] Ensuite, il s'agit de précipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la précipitation Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

L'extraction d'acide nucléique est quelque chose de nouveau pour moi alors je cherche des infos. Aux vues de ce que j'ai trouvé sur le net, avec du phénol acide, il semble assez clair que l'ARn est dans la phase aqueuse et que l'ADN soit dans la phase phénolique (avec des traces dans la phase aqueuse).  [...] Pour l'extraction des ARNs, le P/C/IAA doit être à pH acide (~5), ce qui va dénaturer l'ADN pour se retrouver dans la phase organique et pour ne trouver que les ARN dans la phase aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] biologie moléculaire

Tu lyse tes cellules avec un réactif acide contenant de l'isothyocyanate de guanidium et du phénol. On fait une séparation par centrifugation avec du chloroforme ou du bromochloropropane. Tu obtiens une phase aqueuse (ARN), une interface et une phase organique.  [...] Les deux techniques les plus employées en laboratoire pour extraire de l'ADN plasmidique (je ne sais pas s'il y en a d'autres) sont. l'extraction au phénol-chloroforme et l'extraction à l'aide de kits industriels, type OMEGA, Sigma-Aldrich...etc. La première permet de récupérer une plus grosse quantité d'ADN plasmidique que la seconde, mais est plus délicate à réaliser.   [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

mais ce que Je cherche c'est un document détaillé de la chose, avec les protocoles mais surtout les principes de chaque étape … j'ai un tas de documents tiré via divers moteurs de recherche… mais aucun ni complet, soit il n'y a que le protocole, soit on ne parle que de certains aspects de la manipe….   [...] - Après avoir placé le melange contenu cellulaire/phenol, il faut agiter afin que l'ADN puisse se retrouver dans la phase aqueuse que l'on recupère après avoir centrifugé. 2 phases sont visibles. la phase aqueuse au dessus contenant l'ADN, la phase organique contenant l'ARN et l'interphase contenant les protéines.  [...]

[Biochimie] Les lipides

Ton truc la c'est juste un mélange de deux phases. une phase organique (huile) et une phase aqueuse (eau).  [...] eau+huile+noir soudan+ détergeant. le détergent crée des micelles qui permettent une émulsion d'huile dans l'eau, les lipide noires doivent apparaitre gris et bien homogènes dans la solution... On n'a plus deux phases mais une seule et les lipides en solution sous forme de micelles.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN ARN extraction

Merci pour la réponse. On m'a dit qu'il y avait une histoire d'histones qui seraient plus ou moins attachées en fonction du pH, ce qui permettrai de rendre soluble ou non l'ADN en phase aqueuse car la présence d'histones favoriserait la solubilité en phase organique.  [...] Attention. pour faire des extractions d'ARN, il faut un phenol acide, et pour l'ADN un phénol tamponné. Si tu prends un phenol acide pour une extraction d'ADN, tu as un rendement très bas, car l'ADN reste dans le phenol et non dans la phase aqueuse.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

Je récupère le surnageant puis j'ajoute 500µL de chloroforme, je recentrifuge le tout 10 min. Je récupère la phase aqueuse puis après je fais les étapes avec l'isopropopanol puis éthanol.  [...] -vortexer 30'' (pas moins, c'est l'étape la plus importante, celle ou tu récuperes les acides nucléiques dans la phase aqueuse, et le reste dans la phase organique).  [...]

Solubilite des phospholipides

6. Centrifuger 15 minutes, 500 g. Récupérer la phase organique. Réextraction sur la phase aqueuse des lipides restant avec une solution Chloroforme/méthanol/NaCl (86/14/1, v/v/v).  [...] ils s'extraient dans la phase aqueuse. Chez les plantes, tu n'auras pas ce problème (n'en déplaise à une équipe américaine, je ne crois pas une seconde que les plantes aient des acides sialiques).  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

En fait on a ajouté à l'echantillon d'hypophyse 800 µl de Trizol. Aprés homogeinisation, on a incubé pendant 5mn. Ajout de chloroforme (incubation 3mn) et centrifugation à 12 000 tours pendant 15mn à 4°C. On a obtenu une phase aqueuse transparente contenant L'ARN et une phase rouge contenant l'ADN et les proteines.  [...] Après avoir récupéré la phase rouge contenant l'ADN et les protéines, on a ajouté 300µl d'éthanol 100% pour précipiter l'ADN. Après incubation 3mn, on centrifuge à 4600 tours pendant 5 mn. On prélève la phase aqueuse à laquelle on ajoute 1ml d'isopropanol pour précipiter les protéines.  [...]