• Forum - Objectif, Protéine, Bactérie

[Biotechnologie] Expression d'une protéine

Dans le cadre d'un travail personnel, j'ai pour objectif d'exprimer une protéine d'une bactérie dans la bactérie E.coli.  [...] La séquence du gène comporte en 5' un site BamH1, et c'est le seul site du gène. Je voudrais insérer ce gène dans le vecteur d'expression mais je dois créer des sites de restriction en amont et aval du gène et je ne sais pas comment faire. En fait, si j'isole mon gène depuis la bactérie, je me retrouve avec 617 pb, comment puis-je ajouter des nucléotide amont et aval pour créer des sites de restriction (mutation par PCR) sur ces sites.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue La protéine de fusion pourrait-elle mimer les fonctions de la protéine soluble initiale.  [...] En fait on utilise ces protéines de fusion pour faciliter la purification de la protéine et son couplage ultérieur à autre chose pour de la vectorisation. En général c'est juste le domaine Fc qui est pris dans la protéine de fusion, si tu veux en savoir plus envoie moi un MP.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

Donc tu fais une precipitation au Sulfate d'ammo, c'est quoi en détail ton protocole Peux tu doser la quantité de protéine avant et après precipitation Tes conditions expérimentales de mesure de cinétique sont elles identiques avant et après précipitation.  [...] Il faudrai également savoir, si la précipitation n'endommage pas la protéine et donc si il n'y a pas une perte d'activité catalytique. Pour cela il faudrai determiner l'activité spécifique, avant et après précipitation.  [...]

Aide article : Système d'expression protéique hautement régulé, modulé et à haut niveau (PBAD)

Vectors Containing the Arabinose PBAD Promoter. Cette article démontre l'avantage d'utiliser un système arC -PBAD (d'un point de vue cinétique, efficacité et peu d'effet secondaire), cependant il date de 1995, j'aimerai savoir si actuellement il existe un système de régulation de l'expression protéique qui le surpasse.  [...] C'est quoi l'objectif Production de protéine ou contrôle d'expression Dans E. coli, levure ou cellules humaines.  [...]

Gardnerella vaginalis

le frottis de dépistage du cancer du col de l'utérus n'a pas pour vocation à donner au gynécologue une diagnostic d'infection par tel ou tel bactérie. Son seul objectif est de préciser une infection par le virus HPV ou des lésions pré cancéreuses. Le diagnostic d'infection à Gardnerella vaginalis ne peut en aucun cas (et je suis formel.  [...] Un médicament anti-infectieux ( comprendre ici infection au sens large. toute atteinte d'origine bactérienne, virale, parasitaire ou mycotique) a en général un spectre d'action qui ne limite pas son efficacité à une seule étiologie. on peut tout à fait prescrire le même antibiotique pour une infection pulmonaire, et ensuite pour une infection urinaire par exemple.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR qui veut pas marcher

Bonjour, je suis actuellement en stage dans un labo de recherche. Mon objectif est de mettre en place un protocole de PCR pour faire du typage bactérien. Pour sa, je dois amplifier des microsatellites spécifiques de cette bactérie. En 1er je dois déterminer la dilution limite à laquelle on ne peut plus observer d'amplification sur gel (les dilutions sont du 1/10 au 1/10 000).  [...] D'après ce que j'ai compris, lorsque vous lancez trois séries de réaction, ça ne marche pas. Peut être c'est la duré que vous mettez pour passer d'un mix à l'autre. c'est à dire que si vous mettez la Taq dans la première série de tube, le temps d'arriver aux derniers tube du troisième mix, la Taq pourra être dégradée dans les premiers tubes si vous ne travaillez pas dans les conditions convenables (bac de glace) vue la sensibilité de cette enzyme.   [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

donc l'objectif du travail est d'étudier des protéines qui interviennent dans la réparation des cassures double brin de l'ADN.  [...] sachant que l'objectif du travail est de transfécter des cellules eucaryotes par un vecteur d'expression pour étudier les fonction d'une protéine par western et immunofluorescence.  [...]

[Biotechnologie] proteine recombinante d'interet médical

et les plantes. Donc il faudra utiliser des bactéries comme hôtes mais y a t-il quelqu un qui comprend pour quoi on nous donne les caractéristiques de cette protéine qui sera complétement synthétisée et en quoi ca va aider pour le système d'expressionmerci.  [...] ensuite introduire la molécule d'ADN (vecteur + gène d'intérêt) dans une cellule hôte, qui exécute les instructions qui lui sont fournies par le gène d'intérêt, et réalise les modifications post-traductionnelles (les 3 ponts disulfures et la glycocylation à 15 %) dans l'objectif de fabriquer la protéine recherchée. L'hôte sera donc par exemple des cellules CHO.  [...]

Réflexions sur les épidémies

or cette synthese d'anticorps est longue, car il faut d'abord selectionner la cellule aproprié l'amplifier et la faire synthetiser suffisament d'anticorps. Pendant ce temps le virus et/ou la bacterie se multiplie tres rapidement (temps de generation d'une bacterie de type E.  [...] La vaccination, n'a que pour seule objectif de mettre les cellules immunitaire en contacte avec les antigenes des bacteries/virus en question. Ainsi le systeme immunitaire, va declancher une reponse contre ces antigenes, et en garder une memoire. Ainsi lorsque l'organisme est en contact reelement avec l'agent pathogene le temps de réponse du systeme immunitaire est beaucoup plus court et donc cela permet d'etre protégé.  [...]

[Divers] Huile à immersion

Il y a des vidéos qui circulent et qui sont très importantes pour ne pas faire de bêtise. Il est livré avec sa petite housse de protection, comme il se doit, un petit flacon d'huile à immersion, mais comme c'est de l'huile de cèdre, il y a risque que si l'objectif est mal nettoyé, les résidus sèchent et durcissent.  [...] Je viens de commencer des cours de microbiologie et j'ai pas très bien compris pourquoi on doit mettre un goutte d'huile à immersion (objectif 100x, grossissement 1000x) pour observer des bactéries.  [...]