• Forum - Niveau, Protéine, Intérêt

Quel test statistique utiliser?

Je voudrais comparer le niveau d'expression d'une protéine entre des cellules transfectées et non transfectées. Pour cela j'ai réalisé un lysat cellulaire et fait migré mes protéines pour détecter ma protéine d'intérêt. J'ai par la suite quantifie l'intensité des bandes.  [...] Maintenant je voudrais savoir s'il existe une différence significative dans le niveau de la protéine d'intérêt entre les cellules transfectées et non transfectées.  [...]

[Biochimie] Chromatographie Affinité et NaCl

La rétentions est liées à la solubilité de la protéine dans la phase mobile, si on ajoute du NaCl, le soluté sera moins soluble dans la phase mobile donc il sera mieux retenu.  [...] Mais si on n'utilise pas la structure propre de la protéine mais une modification post-traductionnelle, comme une glycosylation pour retenir notre protéine (phase stationnaire concanavaline par exemple), où est l'intérêt de la concentration en sel ici Au niveau de la concanavaline.  [...]

ubiquitine et protéasome

Le protéasome se situe au niveau cytosolique non Si ma protéine X d'intéret s'exprime au niveau nucléaire, et si je surexprime la protéine Y permettant d'apporter X à la voie de dégradation. est ce que je peux par un marquage spé de la protéine X montré sa dégradation par exemple si le marquage de X se déplace du compartiement nucléaire vers cytosol.  [...] Enfait on s'intéresse à une protéine et apparement elle serait dégradée par cette voie mais rien ne l affirme. Pour etre amené au protéasome elle aurait besoin d'une protéine particuliere. Or cette proteine particuliere je suis entrain de la cloner afin de la surexprimer dans un modele.  [...]

[Biochimie] Normalisation ChIP-chip/microarray

Lors de la manip, j'ai hybride sur l'array un ADN controle (cy5) et un ADN IP (Cy3). J'ai ensuite fais le ratio Cy3/Cy5 pour avoir le signal specifique de binding de ma proteine.  [...] Juste pour preciser, c'est une manip de ChIP-chip. Je ne cherche pas a connaitre le niveau d'expression de mon gene (comme en microarray classique) mais plutot savoir ou se situe ma proteine d'interet sur le chromosome.  [...]

fusion transcriptionnelle et traductionnelle

la fusion traductionnelle est une fusion de gênes effectuée dans leur partie codante et respectant les cadres de lectures. Permet d'obtenir une protéine chimère. cette technique permet par exemple de faire une fusion entre un gène d'intérêt ( qui code pour une protéine d'intérêt ) et le gène qui code pour la GFP.  [...] à propos d'une fusion traductionnelle, j'imagine qu'on peut l'utiliser pour isoler une protéine d'intérêt ou bien réaliser une fusion entre une protéine d'intérêt et la GFP ( pour visualiser et localiser le chemin emprunté par la protéine dans la cellule ) je me trompe.  [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

La protéine d'intérêt fusionnée en N-terminal à la GST a été exprimée chez E. coli puis purifiée sur résine cobalt (lavage en batch). La protéine de fusion a été clivée à la thrombine. La protéine d'intérêt est éluée par simple centrifugation. La protéine de fusion toujours accrochée à la résine est éluée avec de l'imidazole.  [...] Sur la poste correspondant à la protéine d'intérêt (piste 7. 16KDa. flèche noire), il y a quelques contaminants mais surtout un smear remontant vers le haut. On ne retrouve pas ce smear dans l'élution de la GST (piste 8. flèche noire).  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

étudiant en terminale S spécialité biologie/écologie, je suis en pleine révision de biologie pour mon bac à venir. Mais en relisant mon cours sur le génie génétique je n'arrive pas à comprendre comment on produit une protéine d'intérêt.  [...] Déjà, les processus de fabrication varient trop en fonction de la protéine d'intérêt mais il y a quasi toujours les mêmes étapes, c'est à dire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fusion transcriptionnelle et traductionnelle

Après traduction tu auras ta protéine d'intérêt (celle codée par la séquence codante 1) + une protéine codée par un gène rapporteur, comme la GFP.  [...] Maintenant si tu veux non plus localiser une protéine d'intérêt mais quantifier l'activité d'un promoteur donné entre plusieurs conditions, tu peux construire quelque chose comme [promoteur d'un gène d'intérêt]-[5'UTR]-ATG-séquence codante d'un gène rapporteur-STOP-[3'UTR et terminateur de transcription].  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Certes, mais le gros intérêt de la technique est qu'une fois la protéine d'intérêt précipitée, on peut révéler des protéines qui interagissent potentiellement avec elle puisqu'elles auront été entraînées également. Et ça on ne peut le faire en wb.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

Quand j'aurai le résulat de mon WB, je me dirais que mon composé testé à diminué la synthèse de ma protéine A d'interêt...alors qu'en fait ce n'est pas le cas, le composé a favorisé la synthèse d'une autre protéine.  [...] D'autre part lorsque tu feras ta normalisation en western tu la feras sur une 3 ème protéine C indépendante de A et de B, et à priori le niveau de C reste constant (c'est le principe d'une protéine de normalisation). Donc en faisant le ration A/C tu devrais avoir une vision réelle de l'effet de ta drogue.  [...]