• Forum - Mutation, Site, Restriction

[Biochimie] Analyse résultats PCR - TPE

3. La mutation génère/détruit un site de restriction. Vous le voyez en procédant à une digestion de restriction effectuée sur un produit PCR bornant le site de mutation.  [...] 4. L'extrémité 3' d'une amorce doit absolument être complémentaire du fragment à amplifier faute de quoi l'ADN polymérase ne peut pas amorce la réplication. Vous ciblez pile l'extrémité 3' de votre amorce sur le site muté. La PCR ne fonctionne pas contrairement à la population générale.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme de restriction

Ce que vous appelez marqueur c'est simplement une mutation dans un site de restriction qui va faire qu'un fragment d'ADN, obtenu à partir d'un gène donné, va être coupé, ou non, par une enzyme de restriction, selon que le gène est sous la forme d'un allèle, ou d'un autre.  [...] En gros quand la mutation est présente l'enzyme de restriction est incapable de reconnaître son site de restriction et ne va pas le couper.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation d'un Southern Blot

J'avais d'abord pensé à une mutation ponctuelle sur le site de restriction Eco R1, mais l'homogénéité des bandes infirme cette hypothèse. Si c'était le cas, on devrait avoir une des deux bandes plus épaisses, voire la disparition de la bande de 3kb au profit de la 4kb.  [...] J'avais d'abord pensé à une mutation ponctuelle sur le site de restriction Eco R1, mais l'homogénéité des bandes infirme cette hypothèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme et hétérozygotie

J'ai une mutation hétérozygote sur un gène qui crée un site de restriction. pensez-vous que si j'utilise l'enzyme de restriction pour ce site sa vas vraiment digérer sachant que la mutation est hétérozygote.  [...] J'ai essayée pour une mutation homozygote et sa marche, pensez-vous que je pourrais avoir un profil de restriction différent parceque la mutation est hétérozygote.  [...]

[Génétique] marqueurs dominant et codominant

je un souci qui m'empêche de comprendre les caractéristiques des marqueurs moléculaires c'est en rapport avec les marqueurs dominants et codominant la définition est simple mais ce que je ne n'arrive pas à comprendre c'est comment un marqueur peut apparaître sur gel parce qu'il est codominant (2bandes)et l'autre qui est dominant n'apparaît qu'une seule bande.   [...] je pense que tu melanges pas mal de chose. Intuitivement je dirais que la mutation a l'origine du phenotype codominant cree un site de restriction donc tu vois deux bandes, alors que la mutation conférant un phénotype dominant ne le fait pas et donc il n'y a qu'une seule bande.  [...]

Southern blot et séquençage - Interprétation

Question 2. Traduisez la region d'interet pour les deux individus en commenc'ant la lecture a la premiere base (Figure 2, NB. il s'agit du brin +), positionnez le site de restriction de Xho I sur la ou les sequence(s), donnez toutes les caracteristiques de l'evenement mutationnel en affinant votre reponse de la question 1.  [...] Et on remarque que la mutation (transversion) qui a transformé le A en C, a fait apparaitre le site de restriction de l'enzyme (CTCGAG) chez l'individu 2.  [...]

[Biologie Moléculaire] polymorphisme de restriction

je suis entrain d'étudier les polymorphismes de l'adn et je n'arrive pas à comprendre la défintion du polymorphisme de restriction (rflp). Dû a une mutation entraînant l'apparition ou la disparition d'un site de restriction.  [...] C'est une séquence de l'ADN qui peut être reconnue par une enzyme de restriction. Les enzymes de restriction sont des protéines capables de reconnaître ces sites et de couper l'ADN à ce niveau. Les sites de restriction ont la particularité d'être des site palyndromiques, c'est-à-dire qu'ils sont les mêmes dans un sens ou dans l'autre.  [...]

[Biotechnologie] Expression d'une protéine

La séquence du gène comporte en 5' un site BamH1, et c'est le seul site du gène. Je voudrais insérer ce gène dans le vecteur d'expression mais je dois créer des sites de restriction en amont et aval du gène et je ne sais pas comment faire. En fait, si j'isole mon gène depuis la bactérie, je me retrouve avec 617 pb, comment puis-je ajouter des nucléotide amont et aval pour créer des sites de restriction (mutation par PCR) sur ces sites.  [...] Il suffit de rajouter les sites de restriction avant l'ATG sur le primer forward, et après le STOP sur le primer reverse, en prenant soin de rajouter quelques nucléotides (j'en met 5 perso) de part et d'autre pour faciliter l'assise des ER.  [...]

Carte de restriction

Idem avec le plasmide B pour générer les 3 fragments, en supposant qu'on utilise la même enzyme de restriction pour les 2 plasmides Où se situe le site de restriction surnuméraire et à quoi cela correspond-il concernant la mutation.  [...] Je ne vois pas en quoi une représentation linéaire d'une carte de restriction diffère de celle en représentation circulaire. Prenons un exemple concret où le 1er site de restriction se situe en position 278 sur le plasmide circulaire et le second en position 778 dans le premier cas de figure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fréquence de sites de restriction

Ca serait bizarre de rediviser le nombre théorique de site de restriction parla probabilité d'avoir un site de restriction. Je pense que, comme l'a dit jmbowie, il faudrait voir s(il ne faut pas considéré une digeston ménagée ou tout les sites ne sont pas clivé.  [...] * on divise le nombre total de sites de restriction (ici, on nous dit que c'est 100 pour Sau3A) par ce facteur et on aura le nombre de sites qui ne seront potentiellement pas digérés.  [...]