• Forum - Mutation, Restriction, ADN

Génie génétique

Afin de caractériser au niveau moléculaire la mutation hisD984, les ADN des souches LT2 ( souche sauvage d origine) et TR6238 ( souche LT2 modifiée contenant la mutation hisD984 après mutagénèse chimique) sont préparés et digérés séparément par différentes enzymes de restriction.  [...] ta sonde radioactive est ton M13Hol76. Il s'agit surement de portion d'ADN radioactif purifié. Elle est sans doute introduit dans ton produit de digestion avant de le faire migrer. Dans la logique, cette sonde se liera uniquement à ta souche sauvage.  [...]

[Biologie Moléculaire] polymorphisme de restriction

je suis entrain d'étudier les polymorphismes de l'adn et je n'arrive pas à comprendre la défintion du polymorphisme de restriction (rflp). Dû a une mutation entraînant l'apparition ou la disparition d'un site de restriction.  [...] Il existe différentes enzymes de restriction qui reconnaissent chacune une séquence différente.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme et RFLP

Dans ce cas ce qu'il faut voir c'est que l'enzyme de restriction coupe l'ADN en un certain endroit, qui contient un certain motif. Si la longueur du fragment est différente c'est que le motif n'est pas au même endroit, ou encore que le motif attendu à l'endroit usuel n'existe plus, donc c'est qu'il y a une mutation quelque-part dans le motif.  [...] La méthode des enzymes de restriction (plus tellement employée je pense) n'est qu'un révélateur de mutations dans le gène étudié.  [...]

Technique : RFLP

Si le fragment possède un site de restriction X, il est clivé en ce point (par l'enz. de restriction correspondante) et il y aura migration de fragments plus courts que si ce site de restriction est absent (mutation).  [...] tu as dis précédemment que l'adn était coupé en point x (car site de restriction) et cela donnait des fragments. Soit, mets tu dis que s'il y a absence de ce site alors il y a migration de fragments plus courts ce ne serait pas le contraire par hasard, car si présence de site de restriction alors ca coupe donc longueur moindre que s'il n'y avait pas de site.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme et hétérozygotie

J'ai une mutation hétérozygote sur un gène qui crée un site de restriction. pensez-vous que si j'utilise l'enzyme de restriction pour ce site sa vas vraiment digérer sachant que la mutation est hétérozygote.  [...] J'ai essayée pour une mutation homozygote et sa marche, pensez-vous que je pourrais avoir un profil de restriction différent parceque la mutation est hétérozygote.  [...]

[Biochimie] Analyse résultats PCR - TPE

3. La mutation génère/détruit un site de restriction. Vous le voyez en procédant à une digestion de restriction effectuée sur un produit PCR bornant le site de mutation.  [...] 4. L'extrémité 3' d'une amorce doit absolument être complémentaire du fragment à amplifier faute de quoi l'ADN polymérase ne peut pas amorce la réplication. Vous ciblez pile l'extrémité 3' de votre amorce sur le site muté. La PCR ne fonctionne pas contrairement à la population générale.  [...]

Enzymes de restriction

La méthylation de certaines bases, chez les bactéries, permet, si j'ai bien compris, d'éviter à l'ADN d'être découpé. Et donc pour éviter que son ADN soit découpé, la bactérie méthyle les bases qui correspondent à son (ses) enzymes de restriction... C'est cela.  [...] Ici on parle un peu du même système qu'avant, mais au niveau du phage. Lorqu'un phage infecte une bactérie, il veut éviter qu'un autre phage infecte cette meme bactérie (coinfection) pour cela il utilise le système de restriction/modification. Ainsi l'ADN du deuxième phage entré sera clivé s'il n'a pas les bonnes modifications.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse

Il faut déterminer le nombre de fragments de restriction et leurs tailles pour l'hydrolyse des 2 ADN (ADN1 et ADN2) par les deux enzymes (BamHI et XhoI).  [...] -. Je ne sais pas trop comment on peut procéder puisque je n'arrive pas à comprendre comment on a obtenu la carte de restriction de l'ADN 2.  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

Certaines enzymes de restrictions ont des fréquences de coupures plus grandes suivant la complexité de la séquence reconnue.  [...] Pas necessairement, souvent n'importe quelle enzyme de restriction coupera n'importe quel ADN genomique. Cependant il y a certaines limites. Par exemples.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme de restriction

Quand on utilise le polymorphisme de restriction pour localiser une mutation dans le génome et qu'on utilise donc des marqueurs, je voudrais savoir comment on les a déterminé ces marqueurs.  [...] En gros quand la mutation est présente l'enzyme de restriction est incapable de reconnaître son site de restriction et ne va pas le couper.  [...]