• Forum - Migration, Fonction, Poids

[Biologie Cellulaire] Interêt d'une réduction et d'une alkylation pour un gel bidimensionnel

Dans le protocole du gel 2D, juste avant de lancer la migration de la deuxième dimension (séparation en fonction du poids moléculaire) deux étapes de réduction et d'alkylation sont necessaires.  [...] Ma question est simple. quel est l'intêret de ces opérations Est-ce pour rendre les protéines le plus neutre possible et les faire ainsi migrer seulement en fonction de leur poids.  [...]

Recepteur à l'insuline en SDS PAGE

Voila comment, si mes souvenirs sont exact, l'électrophorèse avec SDS permet de faire migrer chaque protéine en fonction de son poids moléculaire...car celui ci est fonction de la taille du baton que forme la protéine en présence de SDS,et donc du rayon de stocke auquel celà correspond (*gros doute.*).  [...] Ce n'est pas le tampon de migration qui contient du beta-mercapto, c'est le tempon dans lequel est repris les protéines laemli. Cette etape, denature totalement la proteine (pont S-S compris). Ensuite la presence de SDS permet de faire migrer les protéine uniquement en fonction de leur poid moleculaire apparent.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse en condition dénaturante et native

Alors on réalise une électrophorèse sur la Bêta-Lactoglobuline (une protéine du lactosérum) dans les conditions natives, cette dernière donne une migration en deux bandes A et B d'égales intensités mais ayant des niveaux de migrations différents. Par contre, son électrophorèse en présence de Dodécyl sulfate de sodium (SDS), donne une migration en une bande unique dont le PM est évalué à 18300 Daltons.  [...] Je pense que lors de l'électrophorèse en conditions natives, la protéine est séparée en fonction de sa charge et de son poids moléculaire(PM) d'où la migration en deux bandes A et B. Quant à son électrophorèse en présence de SDS, la séparation de la protéine est en fonction de son PM seulement, je me trompe.  [...]

[Biologie Moléculaire] SDS page

Salut, le SDS a pour fonction dans une electrophorese de supprimer le facteur charge dans la migration et de faire en sorte que les composants les plus legers migrent le plus haut et les plus lourds migrent le moins.Sa permet de pouvoir determiner le poids momeculaire des composants identifiés si on en connait un.  [...] SDS (Dodecyl Sulfate de Sodium) dénature la macromolécule et la charge négativement, permetant donc la séparation en fonction du poids moleculaire.  [...]

[Immunologie] immunoblot...

Pour lire un poids moleculaire d'une proteine inconnue sur un gel, je dessine une courbe de calibration avec mes poids moleculaires standards. et apres Y a t-il un rapport logarythmique dans la migration des molecules.  [...] Je crois que l'objet de la question de Clac2000 est comment, à partir du standard, on détermine pus précisément le PM de la protéine. Si tu la connais, effectivement c'est juste une vérif et une lecture approximative sur le gel suffit. Si tu ne la connais pas, tu peux faire une courbe ou tu mets le Rf (distance parcourue/distance totale) en fonction du poids moléculaire connu de tes standards.  [...]

[Génétique] Génotype Phénotype souris électrophorèse

On purifie de l'amylase salivaire parfaitement fonctionnelle de chaque souris que l'on dépose sur un gel d'électrophorèse.  [...] Après application d'un champ électrique, les molécules migrent et sont séparées en fonction de leur taille, et de leur charge. Un colorant révélant les protéines permet de mettre en évidence 3 molécules différentes. La forme L à migration lente, la forme R à migration rapide et la forme M à migration intermédiaire.  [...]

[Génétique] Electrophorèse-ADN

Non le SDS n'est pas utilisé pour l'ADN qui est déjà chargé négativement. On peut jouer sur la dilution du gel d'agarose pour séparer plus ou moins bien les différents fragments d'ADN qui seront séparés selon leur taille.   [...] L'ADN linéaire migre en fonction de la taille du fragment sans autre ajout. Pour être plus précis, la charge du fragment augmente avec la taille. Les fragments les plus gros devraient donc avoir une migration facilitée. cependant, la résolution du gel freine plus les gros fragments que les petits.  [...]

Migration SDS PAGE

Le problème viens de la migration (200Volt constant, ampérage se régule seul), qui est réalisée en tampon MES (50mM mES, 50mM Tris Base, 0.1% SDS et 1mM EDTA), la migration du gel se passe bien, la séparation du poids de marqueur moléculaire est jolie et bien distincte, mais après coloration au bleu de coomassie (1H sous agitation), et décoloration à l'eau tiède.  [...] Je suis ce protocole depuis toujours pour la migration des gels en tampon MOPS (protéine standard), et je n'ai aucun soucis. Le fait de passer en tampon MES (protéine de faible poids) me donne des gels illisibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelles sont les différentes étapes quand on travaille sur les microsattélites

L'étape trois découle de l'étape deux. Quelles sont les micro-satellites que tu as amplifiés Est ce qu'il s'agit de séquence de 20pb, répétées de 20 à 50 fois Ou de séquence de 5pb répétés 10-20 fois Suivant la longueur du satellite et son nombre de répétition min-max, tu en déduis les marqueurs du poids moléculaire (généralement un marqueur tout les 1-0.  [...] Mais je ne comprends pas super. Normalement, on cherche à connaitre le nombre de répétition (N répétition) car on peut déterminer la taille du fragment amplifier sur gel. Et en utilisant un outil informatique et un bon marqueur de taille, on peut être précis dans cette estimation.   [...]

Immunoblot

pour moi la migration se fait sur un support ( donc le gel) sous l'effet du courant... donc elle inclut le transfert ( le transfert étant la migration du - vers le + en foction du Poids Moléculaire).  [...] dsl j'ai encore une petite quand on fait une électrophorèse sur gel en conditions non dénaturantes la migration se fait en fonction du poid moléculaire(PM) de la charge et de la forme je ne voit pas comment est ce qu'on peut le faire.  [...]