• Forum - Migration, échantillons, ADN

[Biologie Moléculaire] kit d'empreinte génétique de Bio-rad

bonjour. j'ai étudié le kit de bio-rad pour l'empreinte génétique ainsi que leur exemple représentatnt les étapes de l'expérience. Au laboratoire, nous utilisons du BET pour l'eléctrophorèse avec observation sous U.V mais c'est un produit cancérigène alors que pour le kit, ils fournissent un colorant bleu pour la visualisation de la migration des échantillons d'ADN sans U.  [...] V et sans risques, mais ils n'ont pas précisé le nom du colorant bio-safe DNA stain. en faisant une petite recherche, j'ai trouvé le bio-safe coomassie stain mais utilisé pour les protéines. est ce que ce colorant est utilisé aussi pour la coloration de l'ADN et quel autres colorants bleu sont utilisés merci pour votre réponse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Pour le depot du DNA loading buffer 10x de S prime (j'ai changé de lot durant mes manip sans changement apperent des résultats), j'en met 1/9 de mon échantillon pour optenir la dilution du tampon de charge au 1x.  [...] Pour moi c'est un échantillon surchargé (plusieurs ug d'ADN, vraisemblablement) avec une migration trop rapide et, peut-être, un problème de sels dans l'échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

- il contient un colorant (bleu de bromophénol, oranger...) qui permet de suivre la migration à l'oeil nu (pour éviter que de faire migrer l'ADN trop longtemps et éviter qu'il ne sorte du gel...).  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

Si vous avez perdu du signal en laissant trop migrer votre ADN et que vous n'avez pas mis de BEt dans le tampon de migration, vous pouvez également récupérer ce gel et le mettre dans un bain de tampon de migration + BEt + agitation. Il faut incuber pendant un bon moment quand même, donc s'il vous reste de l'échantillon ça peut être plus rapide de refaire un gel et d'en redéposer (en laissant moins migrer cette fois ou en mettant du BEt dans le tampon cette fois ).  [...] Des fois, pour faire migrer beaucoup d'échantillons en même temps, tu mets 2 peignes dans ton gel pour avoir plus de puits (un à l'emplacement habituel et l'autre vers le milieu du gel). Et il arrive que tes échantillons du bas soient mal colorés à cause du BEt qui a migré vers le haut.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Je me suis trompé d'image. Voici l'image de la migration des échantillons pour les 2 méthodes Mon coéquipier et moi avons fait les mêmes méthodes donc on a 2 échantillons de chaque méthode. Toutefois, dans les échantillons extrait par colonne sont plus dégradés ce que j'arrive pas à comprendre.  [...]

[Biologie Moléculaire] les résultats de migration sur gel d'agarose

voyez s'il vous plait les électrophoregramme joints, alors pour entamer la partie suivante aidez moi à comprendre la nature de bondes sur l'électrophoregramme est ce que ceux sont des résultats valable est ce que l'adn n'est pas infecté (voyez smear) et est ce que ces bondes sont vraiment des bondes qui contient l'adn ou juste ceux sont les traces de bleu de bromophénol (suivi de la migration) qui sont détecté par le caméra.  [...] Autres questions s'il vous plait comment calculer le volume de la BET à ajouter dans le gèle d'agarose à 1%(je veux la relation générale s'il vous plait ), sachant que les informations notées sur le tube de stock sont les suivants. 10 ml (10Mg/ml) (Invitrogen) et quelle la méthode la plus pratique est ce que j'ajoute le BET directement dans le gel ou après la migration et la coloration(après la migration sur gèle),et comment calculer le volume du bleu de bromophénol (le colorant) à ajouter pour suivre la migration de l'échantillon de l'ADN.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Quand au fait de pouvoir séparer l'ADN de plusieurs dans un même échantillon, cela n'est pas possible avec les techniques dites classiques. Avec un séquençage de troisième génération (séquençage plus rapide et avec moins de matériel génétique), cela doit être possible, et encore, probablement difficile.  [...] Par traitement informatique, la marge d'erreur risque d'être importante. En cause, le chevauchement de bandes. Admettons que l'amplification du micro-satellite 1 (exemple) du tube A donne 3 bandes de tailles différentes (50, 100 et 150). La même amplification pour l'échantillon B donne 40, 100 et 180.  [...]

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel As tu chargé assez d'ADN.  [...] j'ai coloré avec BET et j'ai bien orienté mon gel mais je vois de la fluorescance sur les puits sans avoir de migration par contre le marqueur de taille a bien migré.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles.  [...] Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge pour électrophorèse sur gel d'agarose

Le souci que je rencontre est que personne dans le labo ne sait quelle est la composition exacte du tampon de charge des échantillons pour le gel. (j'ai utilisé un aliquot laissé par la dernière personne ayant fait de la génétique au labo mais qui a depuis quitté les lieux).  [...] Ce qui est important c'est le dye (bleu de bromophenol generalement) pour suivre la migration et le sucrose/ficoll/glycerol qui permettent a tes echantillons d'aller au fond du puit lorsque que tu deposes.  [...]