• Forum - Méthode, Protéines, BSA

[Biochimie] Dilution en cascade

Je doit réaliser une gamme étalon de la protéine standard BSA (Bovin Serum Albumin) pour doser les protéines de mes échantillons avec la méthode.  [...] Ben dans ce cas là tu prends ta solution solution mère à partir du tube précédent. C'est à dire que tu commences tout d'abord par créer ton tube 5 puis pour faire ton tube 4 tu prélèves dans le tube en l'utilisant comme solution mère puis tu complètes avec du PBS jusqu'à avoir un volume final de 100 uL.   [...]

[Biologie Cellulaire] Problème dosage microBCA

Je souhaite réaliser un dosage de protéines sur lysat cellulaire avec la méthode microBCA. Les cellules sont lysées avec du tampon RIPA (Tris 50mM, NaCl 150mM, SDS 0.1%, Sodium deoxycholate 0.5%, Triton X100 1%). J'ai d'abord fait un test en réalisant des gammes étalons de BSA diluée dans différentes solutions (RIPA, RIPA dilué au 1/3 dans de l'eau distillée, eau distillée).  [...] En fait le problème que j'ai ce n'est pas que le tampon seul interagit de façon excessive avec le réactif (le blanc n'est pas limpide mais ça reste très acceptable), c'est simplement qu'en présence de protéines même à de fortes concentrations par rapport à ce que préconise la notice du kit, je n'obtient pas la coloration escomptée quand j'ajoute le réactif si la gamme a été faite dans du RIPA.  [...]

role de la BSA dans la mesure de la concentration des protéines !!

j'ai lu un article et j'ai tombé sur cette phrase qui dit que la concentration des protéines a été mesuré en utlisant la Bovine serum albumin. j'ai pas compris comment ils ont fait. est ce qu'il y a un nom pour cette méthode parcequ'elle n'est pas mentionnée dans la bibliographie.  [...] En fait, cette méthode sert à quantifier des protéines inconnues en utilisant des protéines avec des concentrations connues à l'instar de la BSA. Avec cette derniére, tu crées une certaine plage de concentrations de sorte de pouvoir trouver la concentration de ta protéine inconnue en extrapolant les D.O.  [...]

[Biochimie] [TP Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne] Niveau L1S1

Les deux et troisième manip du TP consistent à établir la gamme étalon du cytochrome c par dilution d'une solution-mère à 0,5mg/mL dans différents volumes et mesure d'absorption à 408nm ainsi que la gamme étalon pour le dosage des protéines grâce à une solution de BSA (albumine sérique de boeuf) à 1mg/mL avec du bleu de coomassie (méthode de Marion S. Bradford).  [...] On a ensuite dû prélever 20micro litres des fractions 1 à 11 (la dernière contenant les dernières molécules de cytochrome c) et d'y rajouter 1mL de bleu de Coomassie permettant de mettre en évidence la présence des protéines. Avec la gamme étalon du BSA, on a pu obtenir la quantité de protéine pour ces fractions, en micro g.  [...]

Pta

Je viens sur ce forum car j'ai comme projet l'étude de la dégradation des protéines par les bactéries. On pensait utilisé Escherichia coli comme bactérie et la bsa(Albumine de sérum bovin) comme protéine. On était partis sur un dosage par la méthode du biuret avec le réactif de Gornall.  [...] Le problème est que l'on ne sait pas du tout quelle quantité de Bsa mettre dans notre gamme étalon. Si quelqu'un a une idée merci de m'aider.  [...]

[Biochimie] Détermination d'une concentration et d'un degré de pureté

On a dosé la B-galactosidase par la méthode BCA en utilisant la BSA comme protéine standard (ou étalon). Bref après préparation des diverses solutions étalon de BSA et des deux solutions de B-galactosidase (0.1ml d'enzyme + 1.4ml d'eau pour le tube 1 et 0.  [...] 2ml d'enzyme + 1.3ml d'eau pour le tube 2) on mesure l'absorbance des solutions et on trace le graphique (f(A)= masse BSA), on trouve 0.09µg de BSA donc de B-galactosidase (problème d'absorbance pour le tube 2 du coup on ne garde que le tube 1).  [...]

[Biochimie] Dosage de protéine / méthode de lowry

J'ai du mal a saisir le sens de directe/indirecte mais en improvisant je dirais indirecte car tu as besoin d'une réaction pour révéler tes protéines.  [...] La BSA est généralement la protéine standard qui possède tous les aa en quantité relativement représentative des autres protéines.  [...]

Protéines et Mousse

Disons que les protéines sont pas spécifiés, il s'agit juste de mettre au point une methode...On fait mousser un melange, chaque protéines mousse sans une certaine hauteur, on peut donc les recuperer.  [...] Ms c une méthode deja utilisée en labo, parce que la j ai l impression que tu vas jouer sur les parametres, mais sais tu quelles protéines tu vas recuperer au final.  [...]

[Biochimie] SDS page

aprés extraction des protéines. je n'arrive ppas à obtenir des bandes sur mon gel polyacrilamides. même si je précipite mes protéines avec l'acétone. il faut noter qu'il y à smire (trajectoir) sur mon gel. est ce que quelqu'un peut m'aider.  [...] Pour le marqueur je n'est pas déposer, mais j'ai utiliser d'autre protéines d'autres collègues et qui ont montrer des bandes sur le gel.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Est-ce que quelqu'un sait pourquoi il faut ajouter du BSA A-til un rôle particulier de protection ou quelque chose comme ça.  [...] oui 1% c'est pas rien. Faut tenir compte de ça. Ma seule idée c'est celle de l'extraction à blanc, comme ça tu récupères autant de BSA que dans les échantillons. Sauf si tu as besoin d'une activité relative ou dans ce cas tu ne prends pas en compte l'activité absolue en fonction de la quantité de protéine totale.  [...]