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[Biochimie] Biologie cellulaire proteine

Quel est à votre avis la méthode que l'on doit utiliser pour localiser une proteine dans une cellule Je pensais à l'immunofluorescence.  [...] Merci beaucoup pour votre rapidité. Il s'agit de localiser une proteine présente dans des cellules cerebrales. A quelle méthode pensez vous plus particulierement dans ce cas là Merci de m'éclairer.  [...]

Enzymologie

- dans la fiche n3 on parle de denaturation reversible, a première vue jaurais dit que ce termes est fayx mais il est vrai que jai deja vu un exo où on dénaturé une proteines a laide dun détergent et elle a laide dun autre produit (je ne sais plus lequel) la proteine pour retrouver sa conformation.  [...] - En effet la dénaturation peut être réversible. Je pense que cela dépend plus de la protéine considéré que de la méthode de dénaturation utilisée. Certaines protéines sont capables de retrouver leur forme native spontanément alors que pour d'autres protéines, le repliement est endergonique c'est à dire que dans la cellule leur repliement nécessite l'intervention de protéines chaperones qui consomment de l'énergie pour replier correctement la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Traduction de l'ADN

j'ai touvé dans une etude que de l'ADN transmis a une cellule donnée par methode de biolistique transgenese vegetale s'exprimé meme s'il se trouve au niveau du cytoplasme alors qu'on sait qu'un ADN ne peut se traduire en proteine que si il est transcrit au niveau du noyau la ou il y a l'RNA polymerase.  [...] Je ne sais absolument pas si c'est possible, mais je crois que le rôle de l'ARNm est juste celui d'une copie de travail, ce qui permet par exemple une amplification de l'expression d'un gène par la synthèse de plusieurs ARNm (qui donc donneront plusieurs protéines après traduction). Il ne sert que d'intermédiaire.  [...]

Petite énigme à vous soumettre...

C'est là que l'expérimentation RMN peut être intéressante. Prenons la méthode RMN par différence de transfert de saturation (STD-NMR). Cette méthode présente l'avantage de caractériser les intéractions protéine - ligand en transférant la résonnance des protons de la protéine sur les ligands capables de s'y lier.  [...] De plus, je me permets une remarque sur ton idée de radiomarquage, qui ne me semble assez chère aussi, et la seconde méthode, avec le second messager, qui, si testée indépendamment avec chaque molécule, sous-entend... 20.000 manipulations Avec assez de cultures cellulaires pour chaque expérience, extraction des seconds messagers, révélation des protéines... Est-ce bien réalisable.  [...]

Interactions Protéine-Protéine

Dans ce cas la pour vérifier si une interaction est physique, une coimmunoprécipitation peut suffire. Si une interaction physique est en fait une interaction directe, la méthode la plus sur pour ne pas avoir de partenaire intermédiaire est de produire les protéines in Vitro.  [...] Malheureusement, par cette méthode si les protéines n'interagissent pas, ca ne voudra pas forcement dire qu'elles n'interagissent pas ensemble dans la cellule et vis vers ca. On peut sinon utiliser la méthode de double hybride mais il peut aussi y avoir des faux positifs avec des partenaires intermédiaires.  [...]

[Biochimie] séquençage d'une proteine

..). A partir de cela, le moteur de recherche compares les résultats de ton analyze avec les résutats théoriques pour chaque protéine (ce qui prend du temps). Si les résultats de ton analyse et les résusltats théoriques coïncident pour tous les fragments, alors ton peptide provient de cette protéine.  [...] Ensuite, il est possible de séquencer ta protéine de façon séquentielle grâce à la méthode d'Edman que j'ai citée avant. Cette méthode va dégrader ta protéine acide aminé par acide aminé. Le produit de la dégradation est analysé et tu peux ainsi déterminer ta séquence d'acides aminés.  [...]

[Biologie Cellulaire] Co-Immunoprécipitation

Le but de la methode est de recuperer quelque chose qui va etre associe a ta proteine (ligand, proteine, ADN etc...) le plus courant etant une autre proteine.  [...] Pour la partie 1) soit tu possedes un Ac specifique de ta proteine, dans ce cas tu fais une immunoprecipitation, ie que ton Ac va reconnaitre ta proteine, et que tu vas ensuite purifier ton Ac par diverse methode (je ne connais pas la methode du sucre) generalement tu utilises des billes (agarose/magnetique) couplees a des proteines A/G qui vont fixer les Ac.  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

J' ai fait plusieures purifs d'une protéine recombinante de 7 kDa. Elle se trouve dans un tampon Imidazole 500 mM. Je voudrai maintenant la concentré et la passer dans un tampon 50 mM phosphate. Question. est il possible de faire d'une pierre, deux coups et Quels sont le méthodes éfficaces pour concentré et /ou changer le tampon d'une protéine de 7 kDa.  [...] Cela peut aussi permettre de passer la protéine d'un tampon à un autre, il suffit d'éliminer une forte quantité de tampon (ne jamais faire arriver la protéine à sec) et d'ajouter à la quantité restante le tampon voulu. Avec cette méthode, la protéine reste sous forme native et soluble, contrairement aux méthodes de précipitations.  [...]

[Biologie Moléculaire] [biologie moleculaire] Le code génétique

Quant au bug dans cette methode a mon avis tu ne l'aurais meme pas vu, Au moins pour une raison. la nature chimique differente des aa modifierait les proprietes de la proteine ce qui affecterait les methodesde detection de purification (bref tu te rendrais meme pas compte que ta proteine est la.).  [...] Ensuite tu oublies un peu vite que l'on ne connait pas la fonction de 10% des proteines presentent dans une cellules... Lorsque le premier genome eucaryote a ete entierement sequences, les chercheurs se sont appercu que par les technique de biologie moleculaire et de genetique et de biochimie, ils n'avaient identifies que 30% des genes (ce qui signifie qu'aucune fonction n'a pu etre attribuee à 70% des genes en laboratoire.  [...]

[Biochimie] Qu'est ce qu'un pull down?

Voilà je voudrais savoir ce qu'est un pull down en biochimie quand on parle d'interaction Proteines/Liagand.  [...] c'es une méthode qui permet d'étudier les intéractions protéine/protéine (éventuellement protéine/ligand). Le but est d' attrapper les molécules qui intéragissent avec ta protéine que tu immobilise en utilisant un anticorps ou un tag.  [...]