• Forum - Méthode, Extraction, Protéines

[Biologie Moléculaire] Western Blot HIF 1 alpha et HIF 2 alpha

Pouvez vous m'en dire plus sur votre expérience (in vitro ou in vivo. types de tissus ou types cellulaires, méthode d'extraction des protéines), juste pour votre info, HIF-1 et 2 alpha se dégradent très rapidement en milieu non-hypoxique (entre 1 et 5 minutes ).  [...] Donc en fait j'ai fais le western blot sur des tumeurs (manip in vivo) traité avec un antiangiogénique. J'ai lu dans la littérature que le HIF-1 et 2 alpha s'hydrolyse en normoxie mais tout de même dans une tumeur (qui plus est traité avec un antiangiogénique) ca m'étonne.   [...]

Méthodes d'extraction et de purification des protéines recombinées

On dit protéine recombinante. Tu auras plus de réponses sur le forum biologie. En attendant. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Purification_de_protéines.  [...] tu as deu méthodes d'extractions. non dénaturante (qui permet de maintenir l'activité de l'enzyme), dénaturante (si tu n'as pas besoin de conserver l'activité de la protéine).  [...]

Besoin d'aide pour compréhension d'un article

Genomic DNA was extracted from clipped toes or blood using the SDS-proteinase K/PhenolChloroform extraction method. The primer combination L-Pro-ML (5'-GGCACCCAAGGCCAAAATTCT 3') and H-12S1-ML (5'-CAAGGCCAGGACCAAACCTTTA 3') was used for amplifying the D-loop and sequencing.  [...] Methode d'extraction au phenol-chlorophorme au SDS-protéinase K. On veut extraire l'ADN. On va mettre du phénol chloroforme dans notre echantillon pour précipiter les protéines. L'ADN reste en solution dans la phase aqueuse qui est récupérée par centrifugation.  [...]

Petite énigme à vous soumettre...

Le coût, j'en conviens, est important, car la méthode demande des concentrations de ligand importantes (ratio de 1 protéine pour 300 ligands par exemple...). mais elle est utilisée. Si la méthode RMN te rebute, et que tu préfères des techniques plus simples de caractérisation de Kd et de Ki (par des tests in vitro ), j'ai envie de dire que ces tests restent insatisfaisants, car ne reflètant pas d'informations très poussées sur l'intéraction protéine-ligand, comme une cartographie des groupements mis en jeu dans le ligand, par exemple.  [...] De plus, je me permets une remarque sur ton idée de radiomarquage, qui ne me semble assez chère aussi, et la seconde méthode, avec le second messager, qui, si testée indépendamment avec chaque molécule, sous-entend... 20.000 manipulations Avec assez de cultures cellulaires pour chaque expérience, extraction des seconds messagers, révélation des protéines... Est-ce bien réalisable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction protéines pariétales

=. une extraction de protéines pariétales maison afin de réduire le pool protéique mais qui me donne pas assez de protéines.  [...] J'ai une ou deux idées sous le coude. partir sur des volumes d'extraction + importants et précipiter les protéines au TCA tenter un protocole d'extraction des protéines en pH alcalin.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction des ARN par la méthode phénol/chloroforme

[Biologie Moléculaire] Extraction des ARN par la méthode phénol/chloroforme.  [...] J'ai fait pas mal d'extraction d'ARN par cette méthode et je n'utilisais pas ces sels.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

Et, ATM est une grosse protéine, très peu abondante. Y a t-il une méthode d'extraction à privilégier de migration et de transfert.  [...] Sinon, vous êtes en culture cellulaire. Qu'est ce qui vous empêche de faire une grosse quantité de boite, d'extraire vos protéines pour les concentrer.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

Je viens de terminer pour la 6ème fois mon extraction d'ARN totaux à partir de cerveaux de souris par la méthode du Trizol puis Chloroforme et j'ai toujours le même problème. Au final, j'ai une très faible concentration d'ARN (de l'ordre de 200ng/µL).  [...] J'explique en quelques lignes ma méthode. Une fois avoir prélevé le cerveau, je le coupe en 6 parties que je mets chacune dans un tube. J'y ajoute 1 mL de Trizol, je broie le tout au polytron (3x10secondes). Une fois broyé, je centrifuge le tout pendant 15min.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Je suis en stage pour le M1. On travaille sur l'hypophyse de rat et on a fait une technique d'extractin d'ARN et de proteines au trizol. Ensuite les proteines sont mises dans du SDS et stockés à moins 20°C. Sauf que quand on a fait un dosage proteique par la methode de lowry d'où on a obtenu des quantités trés faibles de proteine.  [...] $récupérer les protéines apres extraction aux solvants organiques n'est pas le mieux. Je sais que l'hypophyse n'est pas énorme, mais l'idéal est d'extraire les ARN et protéines séparément.  [...]

BL21 pour production protéines et extractions

J'aimerais extraire mes proteines recombinantes de mon mutant BL21, pour cela j'aimerais eviter les methodes classiques d'extraction (tampon et sonication).  [...] J'aimerais produire de la Taq polymérase, j'ai finalement choisi la souche Mach1. J'aurais aimé une méthode d'extraction/ purification rapide, simple et efficace. Quels sont vos protocoles.  [...]