• Forum - Méthode, Extraction, ADN, Analyse

[Biologie Moléculaire] TP Extraction et electrophorese Sur GEL

J'ai un TP de biologie moléculaire à rendre demain.s dans ce qui conserne la méthode d'éxtraction de l'ADN plasmidique et l'analyse adn plasmidique sur gel d'agarose par electrophorese.  [...] =. je crois que l'adn chromosomique est une molecule de grosse taille,cela empeche qu'elle retrouve sa conformation(contrairement a adn plasmique).  [...]

Extraction d'adn par FPFD

Quelqu'un connait-il la méthode d'extraction d'ADN intitulée fast preparation of fungal DNA (FPFD) Je voudrais l'utiliser mais je sais pas combien de temps je pourrais conserver l'ADN après extraction.  [...]

[Génétique] Extraction de l'ADN au Chelex 100

J'étudie actuellement les différentes méthodes d'extraction de l'ADN et je ne parviens pas à comprendre la méthode d'extraction au moyen de la résine Chelex 100. Est-ce-que quelqu'un qui s'y connait plus que moi pourrait me l'expliquer en termes simples.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN HotSHOT

Pour sortir des sentiers battus, j'ai décidé de tester une autre méthode d'extraction d'ADN pour le génotypage par PCR de mes souris, dont j'ai récemment entendu parlé.  [...] Le protocole Hot SHOT est assez simple. digestion des tissus dans de l'hydroxide de sodium 50mM à 95°C pendant 1 heure, puis +4°C, et neutralisation au Tris pH 8. Centrifuger rapidement et utiliser quelques microlitres de surnageant directement pour la PCR.   [...]

[Microbiologie] Méthodes de lyse bactérienne

en effet le PMSF est un inhibiteur de protéases. Sinon lorsque l'on extrait de l'ADN plasmidique de coli, la methode la plus habituelle est la lyse alcaline en utilisant de la soude.  [...] j'ai jamais fait sur difficile mais sur perfringens et de nombreuse gram +. J'ai tester deux technique. Soit une lyse meca à l'amalgamateur à bille (bead bitter) soit une lyse chimique au lysozyme. Moi je fait ça pour l'extraction d'ADN et les deux méthode donne de bon rendement.  [...]

Besoin d'aide pour compréhension d'un article

Genomic DNA was extracted from clipped toes or blood using the SDS-proteinase K/PhenolChloroform extraction method. The primer combination L-Pro-ML (5'-GGCACCCAAGGCCAAAATTCT 3') and H-12S1-ML (5'-CAAGGCCAGGACCAAACCTTTA 3') was used for amplifying the D-loop and sequencing.  [...] Methode d'extraction au phenol-chlorophorme au SDS-protéinase K. On veut extraire l'ADN. On va mettre du phénol chloroforme dans notre echantillon pour précipiter les protéines. L'ADN reste en solution dans la phase aqueuse qui est récupérée par centrifugation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

En effet ton ADN n'est pas très propre. Il peut y avoir des interactions avec la réaction de polymérisation. Pourquoi ne pas refaire une extraction plus proprement Quelle est la méthode utilisée et l'origine des ADN.  [...] j'ai essayer aujourd'hui en ajotant de le BSA à mon mix de PCR mais malheureusement le problème persiste. En fait je ne peux pas refaire l'extraction parceque je ne peux pas avoir un autre prélèvement de la meme patiente qui m'interesse énormèment. Y a t il pas une solution.  [...]

Possible de faire une extraction d'ADN puis PCR sur E.coli ou entérocoques

pensez vous que une extraction d'ADN sur des bactéries E.coli et entérocoques contenus dans une eau de la Seine est possible Puis la mise en place de la méthode PCR sur celles-ci pour démontrer leur présence.  [...] Si on veut détecter une bactérie, une espèce, une sous espèce de façons spécifique oui on peut faire de la PCR, mais entre l'extraction, la PCR et son interprétation, c'est plus complexe.  [...]

Pureté de l'ADN

Bonjour à vous tous. j aurais besoin d'un coup de main svp. voilà j'ai fait une extraction d'ADN en utilisant la méthode phenol.chlorophorme.isoamyl. En voulant vérifier la pureté de mon ADN par la spectro la do a 260 n'excède pas 0.5 et le rapport 260/280 me donne 1.  [...] J'imagine que vous faites une extraction au phénol/chloroforme, que vous récupérez la phase supérieure, et que vous précipitez l'ADN ensuite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

J'ai bien pensé au problème de la lignée mais j'ai re-analyser des échantillons pour lesquels j'avais un bon résultat il y a quelques mois et je n'ai obtenu qu'une bande alors que je devrais en avoir 2 pour certains, et j'ai utilisé l'ADN issu de la même extraction donc je ne pense pas que ce soit ça.  [...] Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...]