• Forum - Méthode, échantillons, ADN

échantillons d'adn

Bonjour, je recherche la meilleure méthode pour stocker le maximum d'échantillons d'adn (d'individus différents) dans un minimum d'espace. L'idée serait d'avoir l'adn de chaque individu d'une population dans un contenant le plus petit possible. Dans ce cas là vaut-il mieux stocker l'adn extrait ou stocker des tissus dont l'adn est potentiellement extractable.  [...] Selon la quantité de cellules dont tu disposes à l'origine, il existe différents kit d'extraction (de marque QIAGEN pour faire de la pub ) et permettant d'obtenir un volume d'environ 40 microlitres par patient. L'ADN est une molécule relativement stable. Tu peux les garder à -20°C sans que ca ne s'abime.  [...]

[Biochimie] (licence/master) Question sur la pcr pour un rapport de stage, merci

Les inconvénients sont une possibilités de contamination en prélèvement les échantillons, une contamination possible pendant la PCR, méthode qui demande de la rigueur et une technicité.  [...] Dans mon stage, on a utilisé la méthode de la PCR multiplex à temps réel. On veut effectué une prévalence sur 471 échantillons de bovins. Utilisation de la PCR-RAPD n'est pas adaptée, car il faut une étude au préalable sure de l'ADN pur des parasites et des différentes races de bovins étudiées pour les différencier ensuite.  [...]

[Biologie Moléculaire] problème de qPCR sur des échantillons de maïs

je cherche à mettre au point une méthode de quantification en Evagreen d'un champignon dans des échantillons de maïs cultivés en serre, et tout a bien marché (dessin d'amorces spécifiques, quantification d'ADN du champignon pur...) mais dès que j'ai voulu passer les échantillons de maïs, j'ai obtenu des résultats non répétables, avec des pics de fluorescence qui ne correspondent pas au champignon et surtout qui changent d'un jour à l'autre.  [...] Etant donné que lorsque l'on mélange de l'ADN du champignon pur et de l'ADN de maïs pur on n'a aucun problème, j'ai pensé qu'il y avait des composés dans mes échantillons qui inhibaient la qPCR, mais j'ai testé plein de méthodes d'extraction et de purification et rien n'y fait.  [...]

Conservation d'échantillons biologiques à t° ambiante

L'ADN étant très résistant, je (et d'autres personnes de mon labo) suppose que oui mais je préférerais avoir confirmation pour ne pas perdre mes échantillons (et donc du temps).  [...] Tout ca pour dire qu'il est plus simple de payer un peu plus cher et d'envoyer les echantillons proprements que de les perdre et de devoir les refaire les renvoyer une seconde fois. La solution la plus simple, la mieux et la moins chere etant de faire l'extraction d'ADN toi meme, et d'envoyer l'ADN par la poste.  [...]

[Biotechnologie] Comment déterminer le rendement d'une RT?

La seule methode pour determiner un rendement de RT est de rajouter un ARN de synthese pur et de quantitee connue. Si tu sais combien tu met de cet ARN au depart, tu va le traiter comme les autres lors de la RT et lors de ta PCR tu va quantifier ton ADNc provenant de cet ARN en meme temps que tes echantillons.  [...] mais j'ai deux remarques. si tu met un ARN de synthése l'efficacité de la transcription sur celui ci peut dans certain cas ne pas refléter l'eficacité de la RT sur l'ensemble de la population des ARN de l'echantillon.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Je me suis trompé d'image. Voici l'image de la migration des échantillons pour les 2 méthodes Mon coéquipier et moi avons fait les mêmes méthodes donc on a 2 échantillons de chaque méthode. Toutefois, dans les échantillons extrait par colonne sont plus dégradés ce que j'arrive pas à comprendre.  [...]

Qu'est-ce que le postulat de Koch?

la PCR permet l'amplification d'une partie de l'ADN de maniere extremement importante et rapide (une sorte de photocpieuse), cela offre le gros avantage d'obtenir des quantités d'ADN travaillable a partir d'echantillons tres peu concentres.  [...] Comme l'a très bien expliqué Yoyo, cette technique permet une réplication de l'ADN et éventuellement une utilisation des échantillons ainsi obtenus.  [...]

Détection bactériennes

Extraction de l'ADN de l'échantillon (il existe des kits pour ça).  [...] une bactérie par millilitre c'est très peu. Avec toutes les méthodes connues tu vas être dans le bruit de fond. La PCR par exemple amplifie toujours quelque-chose dans les témoins négatifs. Il y a de l'ADN bactérien dans la taq, c'est connu et publié. Il te faudrait concentrer tes échantillons.  [...]

Différences d'ADN entre les ètres vivant ?

Imaginons que tu me demandes de te fournir un échantillon de mon ADN pour faire une électrophorèse et que je te passe un échantillon contenant de l'ADN de salade, quelque chose te mettrait la puce à l'oreille ou non.  [...] Imaginons que quelqu'un me demande de lui passer 2 échantillons contenant mon ADN et que par mégarde je lui passe 2 échantillons d'ADN de salade.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

En effet j'ai fait une gamme d'étalonnage (avec différentes dilutions de l'ADN de champignon) qui m'a servie pour ma régression linéaire, j'ai ensuite estimé la Concentration en ADN de champignon des échantillons. Les amorces sont bien spécifiques de la séquence à amplifier et j'ai réaliser 3 répétition de témoin eau.  [...] Dans le cas d'une quantification dite relative où n'est pas utilisée une gamme de cDNA, le calcule des quantités de cDNA peut alors être 2^-Ct si E=2 (une dilution de raison 2 des échantillons est alors réalisée, mais sans connaissance de la concentration de cDNA cible dans ce même échantillon).  [...]