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compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

oui je sais que c'est pas top d'inventer de résultats mais ce sont les consignes en réalité il vaut mieux que j'invente parce que j'ai pas vraiment le matériel pour faire une transgenèse sur des cellules ES de porc.  [...] Les cellules vont passer devant quelque chose que l'on va apeller grossièrement un récepteur (un peu comme les radars de la police si tu vois ce que je veux dire. ) qui va mesurer la taille de ta cellule, qui va compter le nombre de cellules et qui peut également mesurer une fluorescence sur ta cellule (si tu as fait une construction à la GFP par exemple.  [...]

Isolation ARN

Bon alors j'ai besoin d'isoler les ARN totaux de cellules (fibroblastes plus precisement) en culture monolayer. J'utilise la methode du Trizol (popurquoi aller payer cher des kits alor que ca ca marche). Mais comme je n'ai qu'un petit nombre de cellules, donc une petite quantite d'ARN, j'ai lu qu'il faudrait utiliser un carrier, coööe le glycogene.  [...] OK mais est-ce que cela n'interfere pas avec les applications en aval (a savoir RT et Real time PCR) La mesure de DO est-elle affectee.   [...]

Immunité des abeilles

Dans le cadre de mon stage qui consiste à étudier l'impacte du pollen polluer sur le système immunitaire des abeilles, je dois trouver une technique de mise en culture des cellules immunitaire des abeilles dans des conditions favorables afin de pouvoir réaliser les tests.  [...] est ce que quelqu'un connaitrait une technique ou une méthode pour pouvoir mettre les cellules immunitaire en culture.  [...]

Incubation à 4°C ?

La première méthode de détection du récepteur des LDL à la surface des cellules a fait appel à l'utilisation d'un ligand radioactif, les LDL marquées à l'iode 125. C'est d'ailleurs la liaison spécifique et de haute affinité de ces LDL à des fibroblastes en culture qui a permis à Brown et Goldstein de mettre en évidence le récepteur des LDL.  [...] Lors d'une incubation à + 4 °C, les LDL se fixent à la surface des cellules sans être internalisées, alors qu'à 37 °C, elles sont internalisées et dégradées. Avec une incubation à 37 °C, l'étude fonctionnelle du récepteur des LDL est possible, ce qui permet la détection de l'ensemble des mutations du récepteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture primaire de fibroblastes de souris

J'essai aussi de mettre en culture des cellules musculaires lisses de souris (issues d'aortes) mais je n'arrive pas à en obtenir même en suivant le mode opératoire du labo (découpe de l'aorte en petit morceaux, digestion 45min à la Collagénase I, centrifugation et mise en culture dans DMEM 20%) quelqu'un aurait une méthode.  [...] J'ai besoin des retour de personnes qui font de la culture primaire de cellules de souris, je n'ai jamais rencontré ce type de problème avec des cultures primaires de fibroblastes humains (bien plus facile à cultiver... ).  [...]

marqueurs de sélection

Aucune méthode de transformation n'est efficace à 100%. La proportion de cellules transformées dépasse en effet rarement 1‰. Pour sélectionner les cellules transformées, le fragment d'ADN utilisé doit contenir un gène conférant à ces cellules un avantage sélectif dans certaines conditions de culture.  [...] Si par exemple le marqueur était la production d'un pigment, il n'est même pas certains d'avoir assez de bactérie pour obtenir des colonies de la couleur adéquates si les 1% transformées de l'inoculat sont inhibées par chimiotactisme - auquel cas après croissance on peut très bien tomber à 0,1% ou même 0,001% de cellules transformées au sein de notre culture résultante.  [...]

[Biologie Cellulaire] milieu de culture

lorsque l'on étudie l'effet d'une substance sur la croissance de cellules de cancer de sein quel protocole doit on faire, dans quel milieu de culture doivent être mises les cellules et quelles methodes d'analyse de la croissance des cellules va t-on utiliser, celles qui seront les plus pratiques et les moins couteuses, merci beaucoup.  [...] Je voulais juste savoir se que l'on doit mettre dans un milieu de culture hormis le milieu essentiel pour la culture des cellules mcf7 par exemple et lorsqu'on étudie la croissance des cellules mcf7 en présence d'un composé quelles sont les méthodes appropriées pour voir si les cellules prolifèrent ou meurent.  [...]

cellules souches

Mais globalement, il s'agit d'une culture de cellules primaires. Dans ce cas, après isolement et purification de tes cellules, tu les places dans des conditions de culture adaptées. En sachant que les cellules souches perdent rapidement leurs caractéristiques souches en culture, et c'est là tout le problème.  [...] Par chirurgie plastique, je voulais parler de la chirurgie réparatrice, le traitement des grands brûlés, c'est donc une greffe par les cellules souches. après biopsie de la moëlle osseuse, les cellules souches mésenchymateuses sont isolées et sont mises en culture avec des facteurs de croissance appropriés pour les différencier en cellules épidermiques.  [...]

[Biologie Cellulaire] gros besoin d'aide: toutes mes cellules C2C12 sont mortes!

J'ai du mal à comprendre qu'on te laisse gérer tout cela toute seule. La culture cellulaire ne s'improvise pas et il faut bénéficier d'un bon encadrement lorsqu'on débute de nouvelles méthodologies appliquées à la culture cellulaire, surtout pour la congélation/décongélation de cellules.  [...] J'ai repensé à mes histoires de flasks ce week-end. S'ils n'étaient pas traités pour la culture de cellules adhérentes, mes cellules n'auraient probablement pas si bien adhéré les premières 48h.  [...]

[Biologie Cellulaire] Aide pour culture en boite de Pétri de cellules type cellules d'oignons.

la culture de cellules est très complexe et nécessite des milieux spécifiques dont le prix est assez élevé ainsi qu'un PSM pour éviter les contaminations. Avec la richesse des milieux, une bactérie se développe à une très grande vitesse comparé à tes cellules et détruit ta culture.  [...] En connaissez vous d'autres Quelle protocole utilisé pour mettre en culture ces cellules (faut il prendre une fine couche d'oignon et la posée sur la gelée ) Es ce que les colorants comme le Rouge neutre, le bleu de Méthylène ou Feulgen peuvent inhiber le cycle cellulaire est donc tués des cellules (si oui, quel colorant utilisé afin de ne pas fausser mes résultats).  [...]