• Forum - Méthanol, Protéines, Membrane

[Génétique] Adn

voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une membrane pour un test de type western. sachant que la formulation de ce tampon est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( j'ai deja repondu a cette question) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...] Le méthanol permet de dissocier le SDS des protéines afin que celles-ci puisse se fixer sur la membrane grâce à des interactions hydrophobes non permises par le SDS collé aux protéines.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Je te conseille de transférer sur des membranes de PVDF préalablement mouillée dans du méthanol. La capacité de charge en protèïnes est plus importante (le double de la nitrocellulose).  [...] Ainsi tu peux visualiser tes protéïnes sur la membrane juste en la retrempant dans le méthanol puis en transilluminant. Tu verras peut-être tes bas poids molec apparaître.  [...]

[Biochimie] bruit de fond western blot

Je sais que nous on réutilise le méthanol dans lequel on a trempé la membrane car apparemment on a pas le choix d'utiliser du méthanol par contre pour le tampon de transfert, on peut utiliser de l'éthanol à la place du méthanol.  [...] Je confirme, méthanol pour mouiller la membrane c'est mieux, il suffit de tremper dans quelques ml sous la sorbonne, 30 sec juste histoire de mouiller la membrane, rien de si contraignant... Ensuite on peut la mettre à équilibrer dans le tampon de transfert pour lequel on utilise de l'éthanol.  [...]

[Biochimie] Western blot

L'incubation de la membrane de nitrocellulose avec le methanol est important avant le transfert même si aujourd'hui on à des membranes d'assez bonnes qualité.  [...] Les membranes de nitro sont tres hydrophobes, le passage en methanol permet de les mouiller si tu ne le fais pas tu n'arriveras pas a transferer tes proteines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

Lorsque méthanol est abscent les facteurs de transcription changent de configuration et bloquent l'opérateur du promoteur. La synthèse de la proteine n'a pas lieu. Car ARNpolymerase ne peut s'attacher au promoteur suite à la modification de configuration des proteines indispensable à l'initiation de la transcription.  [...] Pourquoi Car le méthanol porte une influence sur la transcription de l'ARNm indispensable à la traduction des proteines du gène AOX1.  [...]

[Biochimie] Questions Western Blot

Hmm, il me semble que le méthanol permet de rendre la membrane PVDF (plutôt hydrophobe) hydrophile et de faciliter ainsi les transferts. Les membranes de nitrocellulose ne nécessitent pas ce traitement au méthanol pour que les transferts s'effectuent.  [...] Sur le même topic. j'utilise des membranes PVDF. Seulement ma membrane a séchée (exposition O/N). si je la réactive dans de l'éthanol et que je la stripp. cela va-t-il refonctionner.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot /tampon de transfert

Rapidement...pareil, pas d'ajustement de pH et remplacement du methanol par de l'ethanol. Le retrait de l'ethanol peut ameliorer le rendement de transfert de proteines de haut poids moleculaire. On peut supprimer l'ethanol avec les membranes de PVDF, pas conseille avec les membranes de nitrocellulose.  [...] Je me demande si c'est possible que avec le Temps et le voltage que tu mets, tes protéines ne passeraient pas au travers de ta membrane pour se retrouver dans le tampons moux ( je sais plus le nom) en dessous de ta membrane.  [...]

[Biochimie] Questions Coomassie et Western Blot

Le méthanol et l'éthanol rendent le gel plus poreux, ce qui permet de faciliter les échanges avec le tampon (que ce soit de transfert ou de staining en coomassie). Cela permet une meilleure pénétration du coomassie dans le gel pour colorer les protéines, et cela facilite la sortie des protéines du gel pour le transfert.  [...] Pour le transfert, les solvants ont un intérêt beaucoup plus forts car ils permettent la dissociation du SDS des protéines, ce qui permet aux protéines d'interagir avec la membrane de PVDF par interactions hydrophobes et électrostatiques, mais pas ioniques comme l'exigerait une interaction avec le SDS.  [...]

extraction et séparations des composants d'une membrane

Finalement la réponse à été simple...je l'ai posée à un bioanaliste (plus simple qu'un cristallographe). tu met du methanol, les protéïnes précipitent, tu centrifuges ( ultracentrifugeuse) et voilà.  [...] Enfin si tu veux extraire les prtotéines membranaires, si tu précipites... les protéines, je crois que tu précipites aussi les lipides...puisque en fait les protéines membranaires sont toujours (à ce stade) accompagnées de lipides et de détergents dans des structures de type micelle... donc pas facile.  [...]

[Biochimie] Extraction acide gras membranaires de bactéries en méthyl ester

voila je suis légèrement ennuye avec mon probleme ca fait quelque temps que je cherche des reponse mais elle ne me convienne pas pourriez vous m'aider.   [...] g un culot cellulaire auquel j'ajoute de l'ether sec que l'on evapore par un flux azote. Ensuitej'ajoute du toluène sec et du méthanol. Je sais que le méthanol permet de précipiter les proteines mais je ne sais pas du tout à koi sert l'ether et le toluène.  [...]