• Forum - Méthanol, Fixation, Cellules

[Biologie Moléculaire] Etalement chromosomique

Je voudrais réaliser un étalement chromosomique puis fixer les cellules avec une fixation de Carnoy (1/3 A. acétique, 2/3 méthanol).  [...] Plus précisement, acide acétique ne risque t-il pas de me faire perdre des protéines (dasn mon cas histone et protéine du kinetochore).   [...]

[Biologie Cellulaire] /[biochimie] demande de conseils pour la fixation de cellules

Mon problème est que je n'ai pas de marquage spécifique ni en fixation PFA ni en fixation méthanol. J'ai tenté de faire des perméabilisations TritonX100 0,1% ou 2%. ou SDS 0,1% ou 0,5% ( sur chaque mode de fixation)...rien mis à part un bruit de fond faible sur l'ensemble des cellules.  [...] Je viens de tomber dans la littérature sur un papier dans lequel ils observent la même protéine que moi. Ils le font sur des coupes de tissus en cryostat, fixées en éthanol 100% 4°C 30min puis acétone -20°C 3min puis ils font sécher la coupe et la réhydrate avec du PBS. Enfin ils perméabilise en TX100 0,2%.   [...]

fixation des cellules

Je voudrais savoir ce qui se passe dans les cellules du point de vue chimique lors de leur fixation avec du PFA (paraformaldéhyde) et avec du méthanol.  [...] La fixation par l'alcool entraine un phénomène de coagulation due a une déshydratation Le problème rencontré dans ce cas est que les lipides et les petites molécules sont extraites et que la déshydratation va modifier la morphologie des cellules et donc cette méthode de fixation es peut propice a l'utilisation pour les colocalisation ou les analyse au confocal.  [...]

[Immunologie] Méthanol et marquage extracellulaire

j'essaye de faire un marquage intracellulaire de phospho Stat5sur des cellules T (souris). Le protocole implique le marquage extracellulaire classique (marqueur CD4, CD25), la phase de fixation puis perméabilisation utilisant PFA et méthanol.  [...] Mais en utilisant le méthanol, je perds tous mes marquages extracellulaires.  [...]

[Immunologie] utilisation du paraformaldéhyde

Pour moi, il n'y a pas de différence entre les 2 techniques tant que le formaldéhyde est à la même concentration. Et la seule différence est la présence de méthanol pour la stabilisation du formol... or le méthanol est également utilisé pour la fixation de cellules (donc même application que le formaldéhyde).  [...] En plus en présence de methanol, le formaldéhyde est plutot sous forme dépolymérisée et pénètre plus facilement les tissus d'où une fixation plus rapide, ce qui peut avoir son avantage. Pour de l'hisologie classique ça devrait convenir parfaitement à mon avis.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème immunofluo

Pour exemple. les protéines nucléaires nécessitent une étape de perméabilisation plus agressive que les protéines cytoplasmiques.   [...] fixation à la PFA, je n'utilise pas de méthanol étant donné que ma protéine pourrait avoir un lien avec le cytosquelette et il me semble que la fixation méthanol n'est pas top pour le cytosquelette... j'ai testé avec ou sans permeabilisation avec du triton, blocage lait ou blocage serum ou pas de blocage.  [...]

[Biologie Cellulaire] Apoptose et méthanol

Voilà j'ai un petit problème. Je suis en M1 (donc toute débutante dans les vraies manip) et je traite des cellules avec un produit (le CCCP) dilué dans du méthanol pour observer la morphologie du réseaux mitochondrial. Je fais des témoins négatifs en ne traitant mes cellules qu'avec du méthanol.  [...] Et voilà que j'observe des choses quelque peu étranges... après 1h30 de traitement mes mitochondries sont hyperfilamenteuses (par rapport à des cellules Non traitées) et après 3h ces fameuses petites mitochondries commencent à se fragmenter. Alors voilà quelqu'un aurait-il une idée de l'action que pourrait avoir le méthanol sur les cellules je ne trouve pas d'articles scientifiques correspondant.  [...]

Migration SDS PAGE

Je fe fais pas de fixation du gel au méthanol ou autre à part juste coloration au bleu et décoloration à l'eau tiède (qui marche très bien en tampon MOPS).  [...] Sinon, comme tu le sous-entend, peut-être fixer les protéines Même si cela serait surprenant, car cela signifierait une diffusion des protéines à l'intérieur du gel... Mais si tu veux enchaîner sur un WB, c'est pas l'idéal.   [...]

[Biochimie] Fixer des protéines dans un gel

Je souhaite, après fixation des protéines dans mon gel, regarder ces protéines (fluorescente) au microscope (capable de voir une molécule...).  [...] Je vais du coups tenter un peu un mix de ce que vous me proposez, avec une déshydratation/fixation du gel au méthanol suivit d'une pulvérisation du tampon de fixation (formaldéhyde avec éthanol), puis lavage (ou pas, je vais tester)... Je vous tiens au courant, mais ce n'est pas pour tout de suite (une autre expérience en parallèle...).  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS-page

Pour la fixation des protéines sur mon gel. le méthanol et l'acide acétique.  [...] Moi aussi ils sont tous frais mais les constituants, je m'en cogne un peu ^^ il y a juste les solutions de préparation que je dois faire.   [...]