• Forum - Mesure, Activité, Préparation, Enzyme

Purification d'une enzyme

Lors de la purification d'une enzyme, comment par mesure d'activité peut on s'assurer d'avoir obtenu la préparation la plus pure possible et comment vérifier que l'on a obtenu l'enzyme à l'état pur.  [...] Il faut que l'activité spécifique de l'enzyme pure (AS en u/mg) soit connue. On mesure l'activité de la préparation en unité par mL (u/mL) et on dose la concentration en protéine en mg/mL. Ensuite on fait le rapport activité/mL et mg/mL ce qui donne l'AS de la préparation.  [...]

Biochimie enzymo excercices

Pour le premier exercice, si ton enzyme est de type michaelien et que ta concentration de substrat est trés fortement superieur au Km, alors la vitesse initiale est egale à la vitesse maximun qui vaut. Vm = kcat*[Et].  [...] PS. en general, on calcule l'activité specifique d'une preparation enzymatique en verifiant bien que l'enzyme travaille en vitesse initiale, dans un souci de comparaison possible entre manip.  [...]

[Biochimie] dosage enzyme pour quoi utiliser le bain-marie ?

Je pense que pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu'il faut travailler dans la glace 4C°,c'est pour inactiver l'enzyme(par le froid) et éviter l'augmentation de la température du tissu lors du broyage et de ce fait éviter la dénaturation de l'enzyme, car une enzyme soumise a basse température est inactivé mais elle n'est pas dénaturée (et qui est donc de ce fait détruite comme dans le cas d'une haute température).  [...] Soit on veut empêcher que l'enzyme soit active durant la phase de préparation (car ainsi il n'y a aucun produit de formé, toute l'activité que tu verras par augmentation de l'absorbance sera du à des réaction se produisant à ce moment là), soit il y a d'autres enzymes ou inhibiteurs de ton enzyme dans l'échantillon qui pourrait dégrader ton enzyme d'intérêt.  [...]

[HELP]biochimie enzyme

La concentration d'activité catalytique Ccat correspond à l'activité enzymatique par litre de préparation enzymatique, elle s'exprime en U.L -1.  [...] U est une unité de bêta-fructosidase. elle représente la quantité d'enzyme qui hydrolyse 1 micro-mol de saccharose par minute. C cat = (delta C x (glucose+fructose))/(delta t).  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilité de l'élongation terminale en PCR

Generalement l'activation a 92 deg c'est pour activer l'enzyme qui est soit bloquee par un Ac soit par un traitement chimique. L'enzyme est inactive pour eviter que ta reaction commence lors de la preparation du mix.  [...] pareil pour Gorben a propos de l'activation de ton enzyme. En revanche pour l'élongation terminale c'est un vestige de l'epoque ou les taq marchaient mal et qu'elles polymerisaient quand elles en avaient le temps.  [...]

Rendement de transfection

Après avoir mesurer des DO à 420 nm, on me demande de calculer le rendement de transfection dans chaque tube par rapport à la préparation qui donne l'activité la plus élevée.  [...] L'activité la plus élevée correspond a la DO la plus importante.  [...]

[Biochimie] préparation enzymatique

A propos de l' activité spécifique d'une préparation enzymatique, on la définit en tant que nombre d'unités enzymatiques par mg de préparation. On ajoute que l'AS ne varie plus quand la préparation enzymatique est pure.  [...] Que veut on dire par préparation enzymatique pure quelle est la définition d'une préparation enzymatique de quoi est-elle formée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

Et enfin, encore une petite question. la mesure à 320nm ne se trouve pas dans mon cours (on y parle que de la 260 et 280). J'ai lu en cherchant sur internet que c'était pour voir s'il y avait des contaminants autres que les protéines, car ni les prots ni l'adn n'absorbent à cette longueur d'onde.  [...] C'est le premier TP où on prépare nous même de l'ADN, d'habitude il nous est donné tout prêt, donc une mauvaise manipulation est plus que probable en effet.   [...]

[Biochimie] Enzymologie - Activité Enzymatique

Une preparation enzymatique contient 10 mg de proteines par mL. 100 µL de cette preparation, utilisés dans un volume final (du milieu reactionnel) de 5 mL, catalysent la transformation de 350 µmoles de sucrose par minute dans les conditions optimales. Evaluer.  [...] or on sait que la vitesse c'est C/t c'est a dire j'ai pense diviser l'activite enzymatique 350 par le volume reactionnel de 5 mL pour avoir en mol.L-1.min-1.  [...]

[Biochimie] Influence de la concentration en enzyme Calcul activité spécifique

Par exemple, si une enzyme a une AS de 1000 µmol/min/mg quand elle est pure, et que tu ne trouves que 10 µmol/min/mg dans une préparation, c'est simplement parce que ton enzyme est pure à 1%.  [...] Si au cours d'une étape de purification l'enzyme a été partiellement dénaturée (à cause de conditions défavorables ou d'une erreur), la mesure de l'activité spécifique ne pourra donner qu'une information approximative voire fausse de la pureté de la protéine.  [...]