• Forum - Mesure, Activite enzymatique, Substrat, Enzymes

cinétiques atypiques

lorsque je mesure l'activité enzymatique d'un substrat avec des enzymes recombinantes j'obtiens ceci.  [...] donc forcément l'équation de MM ne convient pas. J'ai essayé avec une équation (inhibiteur non compétitif) comme conseillé pour les inhibitions par excès de substrat. Mais j'obtiens des valeurs abhérantes de km et vm (même si j'ai un R correct).  [...]

[Biochimie] activité enzymatique specifique

Et bien je veux d'abord comprendre comment on calcule l'activité enzymatique et l'activité spécifique à l'aide de µ (Coefficient d'extinction moléculaire).  [...] L'activité enzymatique (1UI = quantité d'enzymes transformant une micromole de substrat par minute) peut être exprimée par ml de solution enzymatique ou rapportée à la masse de protéine enzymatique et on parle alors d'activité spécifique.  [...]

La mesure de l’activité enzymatique par spectrophotométrie et sa relation avec l’NAD

la forme réduite de NAD présente un pic d,absorption dans l'UV à 340 nm, cette propriété spectrale fonde le principe de la mesure de la vitesse des réactions enzymatiques impliquant ces coenzymes.  [...] Je comprends que lors de l'étude de l'activité enzymatique d'une enzyme, si les substrats et les produits n'ont pas d'absorbance cela implique la mesure de l'absorbance d'un coenzyme impliqué dans la même réaction enzymatique. Mais je n'arrive pas à assimiler le suivant.  [...]

Enzymologie

De plus, je voudrai savoir comment mesure t'on une activité enzymatique et si la vitesse initiale dépend de la concentration en enzyme mais aussi de la concentration en substrat.  [...] kcat est la constante catalytique. elle nous montre la rapidité de l'enzyme. Une kcat élevée est synonyme d'une enzyme catalysant très rapidement une réaction (exemple. kcat de la superoxyde dismutase = 1.10 6 donc cette enzyme transforme 1 million de molécules de Substrat par seconde.).  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

- L'unité d'activité enzymatique (UAE). c'est la quantité d'enzyme qui produit la transformation d'une micromole de substrat par minute à 25°C dans les conditions optimale de dosage (pH, T°C,...).  [...] - L'activité enzymatique moléculaire (AEM). c'est le nombre de molécules de substrat transformé par minute et par molécule d'enzyme.  [...]

Inhibiteur compétitif

Tout comme la liaison du substrat à l'enzyme, la liaison de l'inhibiteur compétitif est réversible. Celui-ci, en se fixant à l'enzyme au niveau du site actif (site liant le substrat) réduit par conséquent son activité par compétition avec le substrat. Toutefois, l'enzyme peut atteindre sa vitesse maximale d'activité enzymatique si l'on augmente la concentration en substrat.  [...] Pour répondre à ta question, l'inhibiteur compétitif inhibe toujours l'activité enzymatique, bien qu'en présence de substrat celle-ci existe toujours (même si parfois très faible).  [...]

[Biologie Cellulaire] l'activité enzymatique

Pour revenir à ta question (dans quelle mesure l'activité enzymatique dépend-elle du génotype), trouve le lien entre une enzyme et le génotype (transcription =. traduction notamment) puis le lien entre une activité enzymatique et l'enzyme elle-même (cette activité dépend de l'enzyme, sa forme etc).  [...] Ensuite, ce n'est pas qu'on n'a pas remarqué le dans quelle mesure, mais c'est que ce serait un peu du hors-sujet d'embrayer sur les conditions de la réaction enzymatique. Si l'on se lance dans la discussion quels facteurs modifient la vitesse de réaction catalysée par une enzyme, il faudrait parler aussi des concentrations en enzyme et en substrat, des inhibiteurs (donc, parler de Michaelis-Menten, de Vmax et Km.  [...]

petite question sur la dénaturation d'une protéine

La dénaturation est liée à la structure de la protéine, à la présence de fonctions ionisables ou non. A mon avis si on retire l'agent cahotropique et qu'il n'a pas modifié ces liaisons, certaines pourront reprendre leur état fonctionnel. En plus, est ce qu'il n'existe pas des protéines chaperonnes, pas systématiquement mais qui aident au bon repliement de la protéine Si quelqu'un à des infos, ça m'interrese aussi.   [...] Je me rappelle d'une expérience faite en première. on avait des enzymes et on devait en faire chauffer certaines (à 60°C puis 100°C je crois) et congeler d'autres. Ensuite on vérifiait si elles conservaient leur activité sur un substrat. On faisait ça en analysant leur produit par chromato sur couche mince (CCM pour les érudits ) Et le résulatat était que celles qui avaient été congelée retrouvaient leur activité enzymatique, alors que les autres étaient définitivement dénaturées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Chauffage des enzymes allostérique

J'aimerai bien savoir que devient le substrat lorsqu'on chauffe l'enzyme(allostérique) Vu que c'est une enzyme allostérique, normalement on doit obtenir une sigmoïde si on trace la courbe. (Vitesse en fonction de la quantité de substrat). Mais que devient la courbe lorsque l'enzyme est chauffé.  [...] la chauffage d'une enzyme allostérique provoque une perte de la sensibilité de l'enzyme aux effecteurs allostériques (Attention, l'activité enzymatique persiste.) Il y a seulement destruction du site allostérique. La cinétique devient alors une courbe hyperbolique (Comme les enzymes Michaelliennes) car tu n'as plus le site allostérique présent, donc seuls les inhibiteurs isostériques pourront entrer en compétition avec le substrat.  [...]

[Divers] Détection enzymatique

En fait les enzymes catalysents les réactions non Donc pour détecter une activité enzymatique, il faut regarder à quelle vitesse le substrat se transforme en produit.  [...] Cela dit, en pratique, pour détecter l'activité de l'enzyme, il faut déjà avoir un marqueur. Et même pour être plus précis, il va falloir que t'aies un marqueur spécifique de ce que tu veux mesurer. Toi, potentiellement, ce qui t'intéresse, c'est de mesurer ou la quantité de substrat, ou la quantité de produit.  [...]