• Forum - Membrane, Hybridation, Protéine

[Biochimie] Questions Western Blot

Tout d'abord, comment fonctionne exactement un gel de concentration Si j'ai bien compris, il est censé concentrer en fine bandes les protéines déposées dans les puits en fonction de leur PM, mais comment cela est-il possible exactement Quel est le mécanisme.  [...] -de retenter le coup avec ta membrane uniquement si tes anticorps sont de bonne qualité / ta protéine se révèle facilement. Si c'est pour une hybridation plus délicate, tu risques d'avoir un résultat de mauvaise qualité.  [...]

[Biochimie] Western Blot? Principe de la méthode?

J'ai lu, qu'une étape de transfert entre le gel et une membrane avait lieu, et ensuite une étape de detection avat lieu (anticorps...).  [...] Bah justement, tu as donné la réponse dans ta question, il y a une étape de transfert sur membrane suivie d'une étape d' hybridation qui permet de mettre en avant de manière spécifique une protéine, un ADN ou un ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] analyse southern et northern blot

Voila, j'ai un peu de mal à interpréter les résultats de l'étude d'un gène par hybridation sur membrane. j'étudie une anomalie de production d'un facteur de croissance chez les chats siamois. On a donc réalisé successivment un Southern, un Northern et un Western ( avec la protéine).  [...] Le problème, c'est qu'en western, chez un individu malade on observe aucun signal...pas d'hybridation avec la protéine. Je n'arrive pas a comprendre comment a partir des mêmes ARNm on obtient des protéines différentes.  [...]

[Biotechnologie] ADN ARN ou PROTEINE??

on nous dit juste que c'est hybridation in situ de FGF8 et Sonic helgdog dans un embryon de souri en présence d'alcool et à des temps différents. et pour mon exposé faut que j'explique l'hybridation in situsauf que c'est carrément différent comme technique selon qu'on regarde adn ou proteine ou arn.  [...] du coup ça induit pas synthèse de Shh du coup ya plu le controle positif fgf8 shh je sais pas trop.. FGF8 qui se fixe sur les recepteurs membranaire est sous forme de proteine je crois du coup ce serai logique que hybridation soit de la proteine.  [...]

Southern bruit de fond

Depuis quelque temps, j'ai du bruit de fond sur une partie de la membrane.En effet, la sonde se fixe de façon non spécifique sur la partie non recouverte (en contact direct avec la solution d'hybridation + sonde) de la membrane.En général, la taille de la membrane étant supérieure à la circonférence de mon tube à hybridation, la partie de la membrane recouverte (chevauchement) est propre.  [...] S'agit-il d'un produit défectueux d'une dérive de la température du four.   [...]

[Biochimie] Biologie cellulaire proteine

En première approche l'immunohisto est pas mal. Maintenant si cette protéine ne diffuse pas vous pouvez aussi faire de l'hybridation in situ des transcrits. Vous n'aurez pas la protéine proprement dite mais vous aurez le profil d'expression. L'intérêt est que vous pouvez toujours faire une hybridation in situ alors que vous êtes dépendant des anticorps pour l'immuno.  [...] ok merci beaucoup.Sauriez vous aussi comment on peut determiner si la localisation de cette proteine peut etre affectee par la presence de neurotrans metteurs Merci encore.  [...]

génétique inverse

En génétique classique, on part d'une protéine connue, depuis laquelle on synthétise des sondes ADN dégénérées (c'est-à-dire incluant toutes les séquences d'ADN pouvant coder pour une même partie de la protéine) et on retrouve ainsi le gène originel par hybridation.  [...] C'est, a mon sens, le point central de la forward genetic, la capacite a generer des perte partielles de fonction. Un tres bel exemple est notre papier cite plus haut ou on screen une mutation dans une proteine qui fixe et inhibe les ARNm. Notre mutant est defectif uniquement pour l'ARNm de p53 et pas les autres.  [...]

[Immunologie] expression et phosphorylation de la protéine

Je souhaite avoir une explication pour le faite d'avoir un marquage de ma protéine sous sa forme phosphorylée en immunohistochimie alors qu'au niveau de son expression protéique le marquage est négatif sur la même tumeur. J'explique ça par le spécificité de l'anticorps mais est ce qu'il y d'autres explications.  [...] Les conditions d'hybridation. en WB la protéine est dénaturée, pas forcément en IHC. Certains anticorps ne fonctionnent qu'en IHC.  [...]

[Biochimie] Dot Blot et Northern Blot

Le nothern blot, on fait migrer des ARN dans un gel afin de les séparer. On les transfère sur une membrane et on révèle la ou les bandes qui nous intéressent grâce à l'hybridation de sonde ribonucléiques marquées.  [...] A part la membrane, il n'y a finalement aucune similitude. La question que je ne m'étais jamais posé c'est est ce que l'on a fait des dot blot avec autre chose que des protéines (Je n'ai jamais pratiqué ou vu que cette application).  [...]

[Physiologie] Le CO2 a-t-il du gout?

Je souhaiterai déterminer si l'homme possède un système gustatif sensible au CO2. Chez la drosophile, et fin 2009 chez la souris, il a été montré qu'un gène codant une anhydrase carbonique membranaire était responsable d'un gout du CO2. Cette protéine est exprimé à la surface des cellules qui reconnaissent le gout acide chez la souris.  [...] C'est ce dernier qui est d'ailleurs responsable du picotement et de l'irritation lorsqu'on boit un soda ou de l'eau gazeuse. En fait il me faudrait bloquer cette composante en anesthésiant la branche V3 (nerf mandibulaire) chez des volontaires. C'est ce qui se fait tous les jours chez les dentistes avec les dents de sagesse mais je suis vraiment pas certain d'avoir le droit de proposer ce type d'expériences.   [...]