• Forum - Membrane, Fragments, ADN

Southern blot

L'irradiation aux UV permet de photoponter les molécules d'ADN a la membrane de nitrocellulose. Ceci permet d'eviter de perdre les fragments d'ADN lors des hybirdations.  [...] La neutralisation sert à tamponner (après dénaturatio) étant donné que tu dois hybrider avec une sonde par la suite... Les UV servent à ponter l'ADN comme l'a dit YoYo, cependant cette étape est facultative, et certains sautent cette étapes... (pas moi en tout cas ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

On veut donc que ce soit l'ADN de sperme de saumon, et non notre sonde, qui se fixe non spécifiquement à notre membrane, d'où cet ajout en quantité saturante.  [...] je ne crois pas que l'adn de saumon soit en quantité saturante. Il ne faut pas oublier que ton fragment d'intérêt a migré sur un gel, et est donc concentré sur une petite surface, ce qui n'est pas le cas de l'adn de sperme. Je seche un peu quand même parce que c'est plus vraiment une technique d'actualité.  [...]

TPE sur l'ADN aide pour l'électrophorèse :)

arrêtez moi si je me trompe mais il me semble qu'il faut généralement amplifier par PCR l'ADN (ou plutôt les fragments) avant de la soumettre a une électrophorèse non ou alors c'est uniquement le cas pour l'arn.  [...] Tu utilises des enzymes de restrictions (endo ou exonucléases) qui vont te faire pleins de petits bouts d'ADN. Tu vas faire migrer ces fragments d'adn sur membrane (électrophorèse) et tu vas avoir ce qu'on appelle un profil de migration électrophorétique.  [...]

[Immunologie] Synthèse d'anticorps

Les lymphocytes B de la moelle osseusse vont effectuer un rearrangement de l'ADN du chromosome 14 (fragments d'adn supprimés, associés exct...). Ces réarrangements codent pour des protéines différentes selon le réarrangement. Les genes fonctionnels des lymphocytes B s'expriment ce qui provoquent la production d'anticorps membranaires.  [...] Dans l'organisme, les cellules souches )à l'origine des lymphocytes B sont constituées de fragments de génes (donc d'ADN). Les cellules souches portées à maturité vont effectuer un réarrangement de ces portions d'ADN afin qu'il y ait production d'anticorps.  [...]

Phénomène de réplication (eucaryotes)

Durant la phase d'initiation, l'ADN polymérase alpha synthétise l'amorce ARN-ADN de chaque brin continu et de chaque brin discontinu. Cette amorce correspond à un fragment d'ARN d'une dizaine de nucléotides et un fragments d'ADN de 20 à 30 nucléotides.  [...] 3', pour respecter la 1ère loi de la réplication). Ces blocs de nucléotides sont appelés fragments d'Okazaki, et chaque fragment d'Okazaki fait individuellement appel à une synthèse en 3 étapes comme décrite plus haut (c'est-à-dire Primase-Polymérase alpha-Polymérase delta).  [...]

replication

La primase synthétise des amorces d'ARN ( fragments d'Okasaki ). L'ADN pol 3 utilise ses fragments pour synthétiser l'ADN (ces fragments lui fournissent l'extrémité 5') et la pol 1 éliminera ces fragments et les remplacera par de l'ADN. Enfin, ces fragments d'ADN (qui remplacent les fragments d'Okasaki) seront lié au reste du brin par une ligase.  [...] Les fragments d'Okazaki sont d'ailleurs synthétisés par l'ADN-pol-3 dans le même sens 5' ' 3' (par fragments - d'Okazaki ) que pour le brin synthétisé continuement.  [...]

La PCR fragments d’adn

Tu concentres, et tu fais ta PCR. Il peut être bon de couper l'ADN préalablement par une enzyme de restriction pour avoir des fragments plus courts avant la PCR.  [...] D'accord merci. Oui je sais très bien, c'est à partir des fragments amplifiés que l'electrophorèse est alors possible. La police est alors capable de trouver l'individu si celui ci est fiché au FAEG. Pour cela ils comparent ( a l'aide l'electrophorèse )la migration des fragments de l'échantillon biologique prélevé sur la scène de crime avec celui fiche au FAEG.  [...]

DNA polymérase et digestion de l'amorce

Bonjour à tous, lorsque l'ADN polymérase qui synthétise des fragments d'Okasaki a partir d'une amorce, rencontre l'amorce précedente, elle la digère en remplaçant au fur et a mesure les olugonucléotides de l'amorce par des nucléotides d'ADN ou elle enlève tout, puis revient en arrière, et resynthétise.  [...] On a d'abord synthèse des fragments d'Okazaki par l'ADN-polymérase delta, puis c'est l'ADN-ligase I qui va lier les fragments. Il me semble que c'est l'ADN-polymérase delta qui remplace les amorce ARN par contrôle de lecture après synthèse du fragment. Elle corrige dans le même temps les erreurs.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Bonjour, merci. Oui bien entendu je sais ce qu'est une enzyme de restriction. Une enzyme de restriction reconnait un site de restriction généralement palindromique sur l'ADN une fois reconnu elle clive. Alors j'utilise un ADN de phage lambda c'est de l'ADN circulaire il me semble mais qu'elle est le rapport avec la migration et oui je sais aussi c'est quoi l'électrophorèse sur gel d'agarose c'est la migration de fragments d'ADN ( dans mon cas) du fait qu'on exerce un champs électrique l'ADN étant chargé négativement va migré du coté positive au niveau de la matrice d'agarose les fragments les plus courts migreront plus vite et plus rapidement mais sa m'aide pas pour l'analyse car on a des bandes linéaire et non pas circulaire.  [...] D'accord donc si j'ai bien compris si je n'obtiens pas de fragments, c'est à dire que je reste avec la molécule d'ADN de départ ça veux dire qu'il n'y a pas eu digestion, alors que si je trouve plusieurs fragments qui sont à des positions différentes car migré de manière différente ça veux dire que mon fragment d'ADN initial a été digérer c'est ça.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

Cette région est placée en amont du gène de lacZ (d'une partie seulement en fait, lacZalpha) de sorte que si le fragment à cloner a intégré le vecteur, il décale le cadre de lecture de ce peptide qui n'est plus synthétisé. donc en présence de X-gal, pas de coloration bleue (voir explication plus haut).  [...] si on connais la protéine synthétisé, on la digère avec une protéase puis séquencage aa ce qui permet de retrouver le fragment d'adn et donc le clone.  [...]