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[Biologie Moléculaire] Problème d'amplification de gènes bactériens

Les causes peuvent être nombreuses...Qu'avez-vous essayé de faire pour résoudre ce problème Quelle différence y a-t-il au niveau du protocole entre l'amplification avec un seul type d'ADN bactérien et plusieurs types d'ADN bactériens, hormis la quantité d'espèces d'ADN bactérien différent dans le mélange bien entendu Mettez-vous plus d'ADN dans un cas que dans l'autre.  [...] J'utilise les memes quantites d'ADN dans les deux cas. C'est vrai que l'orsque je melange tous les ADN bacterien j'ai un materiel vraiment concentre. Mais j'ai fait les dilutions necessaire avant PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] mélange équimolaire des ADNs

J'ai 10 échantillons que je dois mélanger pour obtenir un mélange équimolaire de 2µg total, ça veut dire que je dois prendre 200 ng d'ADN de chaque échantillon. Ça veut dire que si par exemple mon échantillon d'ADN est concentré à 40ng/µl, je dois prendre 5µl pour un mélange.  [...] Le volume des échantillons à mélanger est donc différent pour chaque échantillon (à cause de différentes concentrations des ADN).  [...]

Probléme extraction ADN

Sinon j'attire ton attention sur le fait que si l'ADN est trop concentré au final, on inhibe totalement la PCR. C'est un peu paradoxal mais c'est comme ça.  [...] Ca semble contradictoire, mais en fait c'est par titration des ions Mg2+ que ca inhibe la PCR. Si l'ADN est trop concentré alors il suffit d'augmenter la quantité de Mg2+ dans le tampon.  [...]

[Biotechnologie] Pcr

Pour ta question concernant la detection, il n'est pas plus visible lorsqu'il est fixe a l'ADN, il est juste plus concentre.  [...] Réponse me semble-t-il un peu rapide, autant la rectifier même trois ans après. On trouve dans Wikipedia que ce produit est d'une couleur 20 fois plus intense lorsqu'il est lié à l'ADN. La couleur, la fluorescence dépend de beaucoup de facteurs et il suffit de très peu de modifications au niveau moléculaire pour modifier le phénomène.  [...]

[Divers] URGENT Préparations PBS, la vraie?

Vous voyez que la concentration en Phosphate est vraiment très éloignée entre les 2 méthodes pour par exemple un soi-disant PBS 0,1M.  [...] En tout cas, pour parler de concentration, on parle de PBS 1x, 0.1X etc et generalement pas en molair (M) parce que M correspond a une entite ( 0.1M de NaCl par exemple). Mais comme c'est un melange, on parle de 1x concentre (correspondant a tant et tant de M de chaque composant) et on dilue ou concentre (1x, 5x, 0.1x...).  [...]

[biologie moléculaire] Southern blot

J'ai alors pensé à un problème de sensibilité. J'ai alors transféré des concentrations croissante en produits de digestion et toujours rien. Au labo il n'y a que moi qui utilise cette technique du coup je me retrouve perdu... Alors si vous avez des idées pour m'aider elles sont le bienvenue.  [...] Pour cette échantillon je n'était qu'a 250ng/µL mais j'ai concentré mon adn par précipitation EtOH/Na Ac. J'ai concentré 2x, 3x, 4x, 5x et 6x et j'ai utilisé 25µL pour ma digestion...Donc au final j'ai une gamme qui va d'environ 5 à.  [...]

[Biotechnologie] Ogm

Il y a belles lurettes que je n'ai plus fais d'elisa à la main donc là je n'ai plus de protocole précis. Pour les PCR c'est assez simple. Un mix 10 mM dNTP, BSA 1µg/µl, une paire d'oligos nucléotides dirigés contre votre gène d'intérêt (un sens et un anti sens), pour des 20 mer on mets 5 ng/µl.   [...] Vous mettez tout cela ensemble dans un tube et en route pour le thermocycler pour entre 25 et 40 cycles. Le réglage dépend de vos oligos et de vos attentes. Classiquement on a un préchauffage à 95°C durant 2-5 minutes. Puis les cycles (dénaturation 95°C 30 secondes, hybridation 60°C 30 secondes, et élongation 72°C 30 secondes).   [...]

[Biochimie] Diffusion d'huile essentielle

En effet, il existe des dispositifs qui permettent de remplir un petit récipient avec une huile essentielle (concentré) dilué avec de l'alcool, et chauffer le mélange avec une bougie qui se situe en dessous du récipient.  [...] Tu devrais pouvoir trouver ça dans les boutiques spécialisés maison/déco qui vendent souvent de l'encens, bougies, parfum d'intérieur etc.   [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...] Tampon d'élution. souvent composé majoritairement d'eau. Il solubilise l'ADN après nettoyage.  [...]

Concentrer

Typiquement, pour de l'ADN, il existe des protocoles visant à le faire précipiter, puis après re-suspension dans un volume moins élevé, on obtient une solution plus concentrée.  [...] Généralement un ADN plus concentré est plus facile à manipuler, pour le diluer à la concentration voulue, pour faire des PCR plus efficaces.  [...]