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[Biologie Cellulaire] Marqueur pour cellules mortes dans une culture.

Lors d'un TP, nous avons mis des progenitors de cellules nerveuses en culture pendant une durée de 16H approximativement, avant de les analyser. Afin de ne pas biaiser les résultats nous aimerions différentier les cellules mortes, mais à ce stade, je doute que cela puisse se faire simplement d'après la morphologie des cellules.  [...] Existe-t-il un marqueur spécifiques des cellules mortes que nous pourrions utiliser (mais pas spécifique de l'apoptose comme ce que j'ai trouvé jusqu'à présent sur le net).  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture, viabilité et Entretien de lignées cellulaires.

Classiquement le FDA (fluoresceine diacétate), qui est perméant, marque les cellules vivantes en vert fluo (les jaunes n'étant plus très vivaces) en étant métabolisé (donc cellule encore active), et l'IP3 (iodure de propidium) marque le noyau des cellules mortes en rouge (non perméant, donc entre dans le noyau quand la membrane devient perméable, donc cellule morte).  [...] Le volume de liquide qui correspond à un carreau est connu (soit dans la doc de la cellule de comptage, sinon tu peux trouver ca sur internet). Du coup tu peux calculer le nombre de cellules vivantes/mortes par millilitre et ainsi déterminer le volume dont tu as besoin pour repiquer ta culture.  [...]

Densité bactérienne

Le nombre d'UFC correspond au nombre de cellules vivantes, il se calcule en étalant des dilutions d'une culture et en comptant le nombre de colonies sur chaque boite (1 colonie est issue d'1 cellule vivante de la culture liquide) et en faisant des moyennes.  [...] La densité optique, mesurée au spectrophotomètre, quantifie le nombre de bactérie dans la culture mais certaines cellules mortes sont comptées aussi.  [...]

[Biologie Cellulaire] HEK et nitrogène

Je maintiens mes stocks à -80°C au lieu du liquid nitrogen, est-ce que ces conditions de stockage peuvent expliquer ces problèmes de pousse (les cellules décongelées ont l'air saines et nombreuses les premières heures de mise en culture puis elles restent en suspension et ne s'attachent que très difficilement à la boite... La majorité finit par mourir).  [...] Ce qui pourrait poser problème c'est votre technique de congélation qui dégraderait les cellules. Ensuite une fois à -80°C ça ne bouge pas mais quand vous souhaitez les remettre en culture ben là, vous avez bien des cellules mais elles sont mortes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Questions "Générales" en Culture Cellulaire Eucaryotes

-Est-il possible de séparer les cellules vivantes des cellules mortes d'une culture sans cytométrie de flux (ou autre appareil couteux) ni gradient Genre par une simple centrifugation à X rpm pendant X minutes.  [...] Pour la séparation des cellules mortes / vivantes, j'ai testé une centrifugation à basse vitesse (300 rpm pendant 4 minutes). Ma collègue me dit que ce matin, les cellules vivantes lui semblent plus nombreuses que les mortes et les débris (ce qui n'était pas le cas hier). A voir si c'est le hasard.  [...]

[Biologie Cellulaire] Qu'est-ce que la cellule subit dans le Formaldéhyde ?

La cryogénisation à l'azote liquide est une mauvaise idée, surtout sans agent protecteur. Ce qui est mortel pour les cellules, ce n'est pas le froid, mais les cristaux de glace qui vont se former. Ces cristaux sont bien méchants, car ils percent les membranes cellulaires =.  [...] mort. Dans l'état actuelle des connaissances, ces personnes sont mortes dès qu'elles seront réchauffés. J'espère qu'un jour, on pourra les réveiller sans les tuer, mais... En culture cellulaire, on congèle les cellules avec un protecteur (du type glycerol).  [...]

conseil culture cellulaire

Tout comme cococcinelle, je leur laisse du temps pour se remettre, cela permet de se débarasser des cellules mortes et de les laisser reprendre la patate.  [...] les bleues sont mortes. ) ensuite laisse tranquillement les cellules adherentes se diviser dans ta boite, cela peux prendre +/- de temps selon la quantité de cellules vivantes dans ta boite, pense à changer le milieux de culture et quand tu arrive à confluence tu peux passer ta culture pour de nouvelles générations.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

Le premier avec uniquement le milieu de culture ordinaire (Sérum de Veau Foetal SVF) donnait à la fin 100% de cellules mortes.  [...] Le second avec un mélange 10% de DMSO 90% de SVF ainsi qu'une décongélation lente donnait 30% de cellules mortes. Avec le même mélange mais une décongélation rapide (et c'était le protocole classique de cette unité de l'INSERM), on avait 25% de pertes. La décongélation rapide est donc un avantage.  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture de cellules non adhérentes

Comment fait-on pour enlever les cellules mortes En effet pour les passer il est nécessaire de les centrifuger, mais dans ce cas tout même les débris sont culotés et remis en culture donc non éliminés, et des cellule smortes en culture c'est aps terrible pour que les saines poussent dans de bonnes conditions.  [...] ... il suffit de les diluer dans du milieu neuf. Question concentration je sais plus très bien amis je pense qu'on les maintenait entre 2.10^5 et 1.10^6/ml environ. De toutes façons tu le vois aussi à la couleur du mileu quand il faut les passer. Pour les cellules mortes et les débris je ne sais pas trop, on ne fait rien de spécial en fait.  [...]

[Biochimie] Cytométrie en flux !

avec un seul marqeur tu peut soit marquer les cellules vivantes, et déduire du total d'évènement soit marquer les cellules mortes, avec par exemple de l'iodure de propidium, et dans ce cas là tu ne vois que les cellules mortes (apoptose et nécrose pour l'IP).  [...] avec 2 marqueurs tu peux en choisir un spécifique des cellules vivante et l'autre des cellules mortes ou un spécifique des cellules apoptotiques et l'autre des cellules en nécrose.  [...]