• Forum - Marquage, Coloration, Coupe

[Biologie Cellulaire] problème de marquage cytochimique

je réalise des hybridation in situ avec des sondes ARNm (U-DIG) sur coupe de morceau d'éponges. je révèle le marquage avec des anticorps anti-DIG couplé a une phosphatase alcaline. la coloration se fait avec du NBT/BCIP.  [...] le témoin actine doit marquer partout et de la même manière or voila le marquage suis un gradient de coloration allant du pôle basal de la coupe au pôle apical.  [...]

coloration de Gram et glycogène

s'il nous prenait l'envie de tenter le protocole d'une coloration de gram sur un muscle/une coupe de foie, aurait-on une chance de voir un marquage spécifique du glycogène.  [...] Chez les autres (bactéries à Gram négatif), les peptidoglycanes sont moins nombreux et couverts par une membrane externe composée de lipopolysaccharides qui retiennent un colorant rouge.  [...]

[Biologie Cellulaire] MTT et Cristal violet

J'ai eu la semaine passée mon premier TP de culture cellulaire et j'ai du colorer 2 plaques a 96 puits avec 2 méthodes de comptage différentes, MTT et Cristal violet.   [...] Quels mécanismes sont à l'origine de la coloration Interactions du colorant avec un élément précis de la cellule, métabolisation du composé en dérivé coloré, etc... Du coup, il peut y avoir dans certains cas un marquage de toutes les cellules, et dans d'autres cas un marquage uniquement dans les cellules métaboliquement actives Quel temps de manip pour chaque Depuis la préparation jusqu'à la lecture y'a t'il une technique plus longue que l'autre La lecture en question, comment se fait-elle.  [...]

Bleu de coomassie

On l'utilise généralement pour colorer les protéines dans un gel d'acrylamide. Il y a plein de recettes (meme sur wikipedia) pour préparer une solution de travail qui contient effectivement de l'acide acétique (et de l'ethanol).   [...] Pour décolorer (le gel sans protéines, c'est à dire pour diminuer le bruit de fond) on utilise une solution d'acide acétique ou même de l'eau (moi je passe le gel dans l'eau au micro ondes pour augmenter le contraste).   [...]

[Biologie Cellulaire] probleme d'immunohistochimie

La technique j'utilise est classique. on place des coupes de tissus, issu de bloc de paraffine, sur des lames après les avoirs coupés au microtome. On enlève la paraffine, on rehydrate, on fait l'antigen retrieval (citrate buffer et chauffage au four a micro-onde), incubation avec l'anticorps primaire, puis avec l'anticorps secondaire biotynilé, puis avec les billes de streptavidine-peroxydase, et enfin la révélation avec le peroxydase substrate kit DAB SK-400 vector lab.  [...] Question stupide. vos marquages fonctionnent ils dans les mains d'un autre expérimentateur L'IHC n'est quoi qu'on en dise, pas encore une technique parfaitement standardisée, certains anticorps ne fonctionnent pas en paraffine (les coupes congelés sont à essayer), tous les antigènes ne sont pas démasqués par le citrate 0.  [...]

[Biotechnologie] protocole

le Oil-Red-O n'est pas un colorant des adipocytes, et ne l'a jamais été. C'est un colorant des lipides neutres. Certes il colore un adipocyte parce que c'en est plein, mais ce n'est pas spécifique du type cellulaire. Le marquage sur coupe parraffine est très mauvais simplement parce que le xylene ou équivalent utilisé pour l'inclusion et la réhydratation dissout les lipides.  [...] Dernier point, c'est mon jugement personnel, une cellule colorée a l'oil red o n'est pas forcément un adipocyte. Pour ma part je juge irrecevable, comme preuve, un marquage de la sorte, d'autant que la coloration n'apporte pas énormément d'informations par rapport à la simple observation morphologique de la cellule.  [...]

[Génétique] localisation d'un gène sur un chromosome.

Pour reconnaître spécifiquement chaque paire chromosomique, on utilise des techniques de marquage particulières qui permettent d'obtenir une coloration inhomogène des chromosomes par le Giemsa et l'apparition de bandes. C'est la succession de bandes sombres et claires le long d'un chromosome, identique chez tous les individus pour un chromosome donné, qui en permet l'identification précise, selon le mème principe qu'un code à barres.  [...] Dans les deux cas, les bandes ne deviennent visibles qu'après une coloration avec le Giemsa. Ces deux techniques donnent un marquage réciproque, c'est-à-dire que là où l'on obtient une bande sombre avec l'une des deux techniques, on observe une bande claire avec l'autre.  [...]

Protocole

J'aimerais savoir si vous avez une idee pour reduire le fond d'autofluorescence rouge due a l'hemoglobine sur une coupe de sang afin de realiser un marquage avec un anticorps fluo rouge.  [...]

[Biologie Cellulaire] Observation de récepteurs post-synaptiques en microscopie électronique.

[Biologie Cellulaire] Observation de récepteurs post-synaptiques en microscopie électronique.   [...] Peut-on observer les récepteurs post-synaptiques en microscopie électronique si oui, faut-il faire une coloration biochimique ou un marquage radioactif pour les observer ou le microscope seul suffit-il à les observer.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique de microscopie à fluorescence

Si c'est ça, je trouve ça un peu étonnant que la cuticule soit si gênante pour l'observation (et si c'est le cas pourquoi ne pas l'enlever directement à la pince avant de faire la coloration).  [...] J'ai également utilisé le NaOH sur mon matériel végétal avant de faire cette coloration à l'aniline, car un traitement alcalin permet au tissu de devenir transparent (sinon, avec l'auto fluorescence de mon matériel, je ne pouvais pas voir le marquage).  [...]