• Forum - Marquage, Cellules, Microscope

[Biotechnologie] Technique de mesure de l'apoptose

Vous pouvez faire une cytofluorométrie en flux en marquant la phosphatidyle sérine, et l'annexin 5 de cellules. Les doubles positifs seront en apoptose.  [...] Un truc pas cher et qui permet d'observer une caractéristique marquée de l'apoptose, c'est un marquage de cellules fixées sur une lamelle avec du DAPI et visualisation au microscope. Les cellules dont le noyau est condensé et/ou fragmenté sont en apoptose.  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture, viabilité et Entretien de lignées cellulaires.

Pour la viabilité, il te faut faire un prélèvement sur ta pré-culture (décongelé et cultuvé sur ton premier milieu). Ce prélèvement tu vas l'utiliser pour faire des marquages avec des colorants fluorescent qui permettent de discriminer les cellules vivantes et mortes.  [...] Ensuite, une fois le marquage réalisé, il te faut placer ton prélèvement dans une cellule de comptage (par exemple une cellule de Fuchs-Rosenthal). Il y a un quadrillage par rapport auquel tu vas compter les cellules vivantes et mortes selon leur marquage, au microscope à fluorescence.  [...]

[Biologie Cellulaire] Apoptose et le gène Bax

Le top pour commencer à définir s'il y a apoptose ou pas c'est un marquage Annexin V/ PI des cellules et analyse en cytométrie de flux. Je ne connais pas les moyens dont disposes ton labo ni si cela fait partie d'un projet de recherche mais je commencerais par là (enfin pas vraiment, il faudrait déjà commencer par regarder la mort cellulaire globale en bleu trypan et/ou marquage PI en cycle cellulaire).  [...] Ce que tu peux faire qui est peu coûteux mais d'une efficacité toute relative, c'est un marquage de l'ADN de tes cellules au DAPI et visualiser au microscope à fluorescence la présence de noyaux condensés/fragmentés. Beaucoup d'autres moyens sont possibles mais pour rester assez général, c'est ce que je vois en premier.  [...]

Le cycle cellulaire

Sur une cellule donnée, on effectue ce marquage et on suit avec un microscope à épifluorescence le déroulement de la mitose. Il existe un topic (je vais tenter de remettre la main dessus) montrant ce que tu vois au microscope.  [...] euh les microspores ça vous connait ( parce que comme vous avez l'air de boss...ça serait cool...) en fait on cherche à comparer les cellules-mères de microspores et les cellules filles il doit y avoir une histoire de méiose là-dessous...mais je vois pas comment les comparer...vous n'auriez pas des schémas par hasard.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueur spéficique apoptose

Le marquage Annexin V en FACS cible l'apotpose. Le problème est qu'après l'apoptose il y a ce qu'on appelle la nécrose post-apoptotique, mais qui se différencie tout de même de la nécrose simple qui elle n'est pas marquée par l'annexin V. On fait toujours un double marquage Annexin V / PI (iodure de propidium), ainsi on peut discriminer 3 types de cellules.  [...] Ben justement, c'est pour ça qu'on fait un double marquage. L'annexine-5 va marquer plus ou moins toutes les cellules mortes, et le deuxième marquage à l'iodure de propidium ne va marquer que les cellules en nécrose. Vu que l'IP est un intercalaire, il ne pourra marquer que les nécrosées, puisque l'ADN des cellules apoptotiques est dégradé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erk Total

En revanche, lors d'immunocytochimie avec Erk total en observant les cellules aux microscopes, on aura un marquage à la fois sur Erk et Erk-p c'est bien ça.  [...] Or sur notre image, on observe que la couleur rouge de l'anticorps anti-Erk phosphorylé est présent dans le cytoplasme et pas dans le noyau... Comment est-ce possible, si Erk est phosphorylé, il est censé allez dans le noyau.   [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

Il y'a une chose que je ne comprends pas.. l'iodure de propidium je crois ne passe pas la membrane plasmique..c'est pourquoi on utilise le double marquage iodure de propidium + annexine V-flurochrome pour détecter l'apoptose en cytométrie de flux. LEs cellules iodure de propidium négative et annexine V positive sont en apoptose, celle en nécrose sont iodure de propidium + et annexine V -, la membrane plasmique étant lésée l'iodure pénetre dans la cellules et intercale l'adn.  [...] Pour le marquage à l'iodure de propidium, dans le cas d'une étude du cycle cellulaire, on fait une fixation dans l'éthanol à 70% ce qui fait office de perméabilisation pour la pénétration de l'iodure de propidium dans la cellule. Dans le cas d'une étude de l'apoptose avec co-marquage à l'annexin V, on ne fai pas cette fixation à l'éthanol, on met directement les cellules en présence d'iodure de propidium, de RNase A (pour augmenter la proportion d'iodure de propidium se fixant à l'ADN) et l'Annexin V.  [...]

[Biologie Moléculaire] marquage des cellules par Idu et BR dU

Bonjour, je suis en premiere annee de master biologie sante et je voudrais avoir des renseignements concernants le marquage immunologique des cellules par le I dU et le Br dU... merci pour vos renseignements... bonne soiree.  [...] j'aurais souhaiter avoir des renseignements sur la technique qui consiste a marquer les cellules avec Idu et BrDU... quels sont les etapes de ce marquage, de quel façon il s'effectue, sur quel type de cellule specifiquement,quel est le but d'utiliser IDU et BR dU.  [...]

[Biologie Cellulaire] Microscope fond rouge?

Je m'excuse par avance de la stupidité de ma question, alors voilà je dois analyser un article scientifique (mon premier ). J'ai globalement compris mais il y a un petit détail que je trouve bizarre. Sur une figure, (image au microscope afin de comparer le nombre de cellules). le fond est rouge.  [...] Dans les schéma E-F, on voit au microscope les cellules avant et après l'ajout de cette molécule. On voit d'ailleurs qu'il y a moins de cellules après l'ajout.  [...]

Marquage IF de l'enveloppe nucléaire

Sur tissu, le marquage IF est spécifique, beau et correspond à nos attentes. Mais nous ne parvenons pas à le mettre au point sur cellules déposées sur cytospin. Peut-être l'anticorps n'accède pas à l'intérieur du noyau. J'utilise du triton pour la perméabilisation mais ceci n'est peut-être pas suffisant. Si vous aviez des conseils à m'apporter. Merci.  [...] Tu peux peut-être essayer de faire ton marquage sur des cellules adhérentes afin de voir si le cytospin n'est pas en cause. J'avais un marquage qui ne marchait pas sur cellules passées au cytospin, leur morphologie semblait compromise par cette méthode.  [...]