• Forum - Marquage, Anticorps, Cellules

[Biologie Cellulaire] Problème immunofluo

quelqu'un aurait de l'expérience en IF voici mon problème. j'ai jusqu'à présent travaillé avec des cellules vivantes en fusion GFP. Désormais je dois faire des IF sur cellules fixées. Pas de problèmes pour un marquage de la tubuline (avec des anticorps) ou pour un marquage actine (avec de la phalloidine), mais pas moyen d'avoir un signal avec ma protéine d'intérêt.  [...] L'anticorps primaire est un anticorps que nous avons fait faire donc rien n'est décrit par rapport à celui ci, en plus il n'est pas purifié, est-ce que cela pourrait jouer.  [...]

Immunologie en jeu video

Deux types de globules blancs sont simulés. Les cellules T qui détruisent les cellules infestées de virus et cancereuses (marquage par anticorps monoclonal). Et les macrophages qui éliminent les bactéries et virions dans les vaisseaux sanguins.  [...] 1) Bon idee d'introduire un temps de vie pour les virions et bacteries. je vais l'ajouter. Peut etre meme pour les cellules et anticorps du systeme immunitaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie

Je rencontre un problème avec un anticorps anti-calbindin qui ne marque pas le soma des cellules de Purkinje en présence d'une étape de 5 min de perméabilisation avec de l'acétone 2%, ou du triton 0,4% ou de la saponine0,5%. Mais le marquage est correct quand le triton est additionné au milieu d'incubation de l'anticorps primaire pdt 1H.  [...] Mais comme ce sera combiné avec de la FISH, j ai besoin de cette étape de perméabilisation en début de protocole.   [...]

[Biologie Cellulaire] Cytométrie en flux

Bonjour tout le monde, petite question technique...je voudrais regarder la différence d'expression d'une protéine par cytométrie en flux dans 2 populations différentes une de lymphocytes T sains et l'autre de lymphome, comment je peux faire pour marquer les populations sachant qu'il n'y a pas a ma connaissance de marqueur spécifique sur les lymphocytes tumoraux est ce que je peux marquer une population AVANT avec un anticorps fluorescent par exemple anti CD4 ou CD8, mais apres quand les é populations vont être mélangées est ce que l'anticorps va tenir et va pas se décrocher pour aller sur les autres qui expriment aussi le CD4ou8 merci de m'aider.  [...] si tu fixes tes cellules apres marquage l'anticorps ne devrait pas se decrocher.  [...]

[Immunologie] Déficience en béta-2-microglobuline

Dans les années 1990, l'inactivation génique de plusieurs gènes intéressants des molécules du système immunitaire a été réalisée, notamment les molécules impliquées dans la reconnaissance du SOI et du NON-SOI. En particulier, différentes équipes ont produits des souris déficientes pour la ²2-microglobuline, le CD4 et l'une des chaines constituant la molécule de CD8.   [...] L'analyse par cytométrie en flux des cellules lymphoïdes présentes dans les ganglions et le thymus a été réalisée au moyen de plusieurs anticorps couplés à des fluorochromes de différentes natures afin de permettre une étude de co-marquage (anti-CD3-FITC, anti-CD20-FITC, anti-CD4-FITC, anti-CD8-PE).  [...]

Marquage IF de l'enveloppe nucléaire

Sur tissu, le marquage IF est spécifique, beau et correspond à nos attentes. Mais nous ne parvenons pas à le mettre au point sur cellules déposées sur cytospin. Peut-être l'anticorps n'accède pas à l'intérieur du noyau. J'utilise du triton pour la perméabilisation mais ceci n'est peut-être pas suffisant. Si vous aviez des conseils à m'apporter. Merci.  [...] Tu peux peut-être essayer de faire ton marquage sur des cellules adhérentes afin de voir si le cytospin n'est pas en cause. J'avais un marquage qui ne marchait pas sur cellules passées au cytospin, leur morphologie semblait compromise par cette méthode.  [...]

[Biotechnologie] bruit de fond et cytométrie

Si tu veux un exemple concret en cytométrie, on marque des cellules (par exemple les lymphocytes T dans le sang) avec un fluorochrome (FITC) couplé a un Ac.  [...] Quand on fait un marquage en cytométrie, on met généralement, un excès d'anticorps. Si tu laves insuffisament, il va rester des anticorps en solution (non fixés aux cellules ou particules) qui vont augmenter le bruit de fond.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

découverte de l'épissage), a eu la brillante idée d'introduire directement des petits ARN interférents (siRNA) dans les cellules de mammifères en culture pour induire l'extinction (knock-down) de gènes cibles. Cela avait été montré chez d'autres espèces avec des ARN double brin (dsRNA), mais les tentatives étaient vouées à l'échec chez les mammifères.  [...] La figure concernée ne montre que le résultat obtenu avec le siRNA Lamine A/C où on voit une forte diminution du marquage cellulaire par l'anticorps anti-Lamine A/C sans affecter le marquage par l'anticorps anti-NuMa. Ce résultat est confirmé par western blot pour les lamines A et C.  [...]

[Biologie Cellulaire] adaptation protocole confocal à cytométrie en flux

j'utilise un marquage anticorps pour localiser une toxine dans le corps cellulaire de cellules adhérentes jusqu'à maitenant, j'ai uniquement utilisé de l'imagerie confocale et je voudrais passer à la cytométrie en flux pour évaluer le pourcentage de cellules marquées (contenant de la toxine).  [...] en fait mes inquiètudes viennent plus des diffcultés que j'ai rencontré pour mettre au point un marquage spécifique avec mon anticorps primaire.  [...]

[Méthode d'étude] Immunochimie : Etape de contrôle.

En gros, chaque anticorps peut se fixer sur la cible attendue (c'est que l'on appelle un marquage spécifique) et/ou sur des cibles inattendues (c'est que l'on appelle un marquage aspécifique). En général, l'affinité de l'anticorps est largement supérieure pour sa cible (il est fait pour reconnaitre cette cible) que pour ses sites de fixation aspécifique.  [...] L'anticorps secondaire suit les mêmes règles. Il est conçu pour se fixer sur l'anticorps primaire mais peut se fixer aussi ailleurs. Un bon moyen de vérifier cela est d'incuber une préparation avec uniquement l'anticorps secondaire. On observe alors uniquement le marquage aspécifique.  [...]