• Forum - Marquage, ALEXA, Cellules

Différentes fibres du cytosquelette d'actine

Une question rapide sur le cytosquelette d'actine. Récemment j'ai fait des marquage à la phalloidine-alexa 488 sur des cellules endothéliales aortiques humaine. Parmi les cellules ainsi marquées, j'en ai découvert quelques rares cellules plus grosses que les autres (cellules sénescentes) qui permettent de voir plus aisément les structures du cytosquelette d'actine.  [...] -De gros filament de grandes tailles qui semblent traverser la cellule de part en part en définissant également le contour cellulaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] pseudo synchronisation des cellules sans faire exprès

Oui un conttrôle où seul l'alexa fluor 488 (censée intéragir avec l'EdU) est incubé. Ces cellules sont marquées à 0%, c'est vraiment un test très spécifique. On m'a dit que les cellules en forte proliération pouvaient atteindre 30% dans un pulse de 30 min de traitement à l'EdU.  [...] Pour savoir si l'EdU a un effet sur la répartition de tes cellules dans le cycle cellulaire (par le biais entre autre d'une synchronisation, ou un blocage en S), tu peux faire un marquage à l'iodure de propidium de tes cellules traitées et non traitées à l'EdU pour les regarder en cycle au FACS. Là au moins tu seras fixé.  [...]

HPLC sur des protéines déjà dénaturées

La sonde est très connue, car c'est Alexa Fluor 488, et l'excès de sonde est normalement éliminé lorsque je purifie pour enlever le SDS est autres réactifs chimiques pour le marquage de la protéine. Par contre, l'absorbance de la protéine devrait être impactée, mais cela doit être mesurable/calculable.  [...] OK. Pour info, le detail du calcul du taux de marquage pour l'Alexa 488 par UV-Vis est précisé ici https.//tools.lifetechnologies.com/c...ls/mp30006.pdf.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence marquage

Connaitriez vous un marquage cellulaire solide pour l'ensemble de la cellule dans le rouge Si non, on peut intervertir rouge pour noyau et bleu pour cytoplasme.  [...] Le but est d'avoir un marquage de la cellule et du noyau le plus homogène possible. je m'en sers ensuite pour modéliser ma cellule dans un code de calcul. Je m'intéresse donc juste à la géométrie de la cellule.  [...]

[Biologie Cellulaire] GFP bleaching

Je voudrais faire un immunomarquage sur des coupes de cerveau provenant d'une souris exprimant deja une proteine taguee GFP. Le probleme est que je n'ai pas beaucoup de cannaux sur mon microscope et je vaudrais donc bleacher ma GFP pour faire un double marquage utilisant un flurochrome vert (type FITC ou Alexa 488) et un rouge.  [...] Je voudrait cependant voir s'il y a de la mort neuronale (par apoptose) et donc souhaiterais faire un marquage TUNNEL. Nous avons un Kit au labo marque au FITC. C'est pour cela que je voulais bleacher la GFP.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluoresence

Mais si tu veux mon avis ils veulent savoir si ton virus AAV est endocyté via les puits de clathrine des cellules HEK. Donc ils incubent les cellules avec le virus couplés au fluorophre Alexa 488 laissent incubé quelque temps, ensuite ils perméabilisent les cellules pour faire entrer les anticorps couplés a un autre fluorophore (rouge celui la) et dirigé contre la clathrine.  [...] Et si les cellules sont en train d'endocyter le AAV via les puits de clathrine, ils devraient y avoir une colocalisation du marquage vert (AAV) et rouge (clathrine) au niveau sous membranaire voire membranaire.  [...]

microvillosités et ciliés

il me semble qu'il y a confusion dans la 1ere réponse. alexa, qu'étudies tu des cellules humaines/animales uniquement car si c'est le cas, on peut trouver des cellules ciliées chez l'homme, les cellules ciliées de l'homme ne sont pas des êtres vivants autonomes.  [...] Les cils sont un prolongement du cytosquelette, ce n'est pas de la membrane mais des microtubules qui sortent de la membrane. on les trouve au pôle apical des cellules épithéliales de la trachée, de l'épididyme (testicules), trompes utérines, cellules de l'audition.  [...]

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence

Là sur 40 échantillons. 20 contrôle et 20 malades (je parle notamment du cortex là) j'en ai 6 qui sont avec le marquage attendu et donc 34 avec le marquage perinucleaire. Mais, les échantillons qui ont le marquage périnucléaire ont des endroits dans le cortex où il y a le marquage entier.  [...] Alors qu'il y a des échantillons où je n'ai que du marquage total et pas que périnucléaire. Cependant, autour et dans l'hypothalamus je n'ai que du marquage attendu pour toutes les lames par exemple.  [...]

Compatibilite quintuple immunomarquage

je souhaiterais faire un quintuple marquage en immunostaining, il me faut donc une bonne compatibilite pour les anticorps, pour ne pas qu'il y ait de chevauchements dans les longueurs d'onde.  [...] En ce qui concerne les conjugués, chez le rat j'ai été obligée de les marquer moi meme car quand on fait du 7 couleurs, tu es limité quant au choix des fluorochromes. Mais je te souhaite de trouver ton bonheur dans les catalogues.  [...]

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Le Mitotracker nécessite une optimisation de sa concentration car il a tendance à marquer aussi d'autres structures cellulaires, donc un risque de fausse interprétation. Un marqueur de la mitochondrie beaucoup plus spécifique et permettant une localisation des mitochondries plus résolue est un marquage anti-Hsp60.  [...] Dans mon protocole, pour l'étape 2 (après s'être débarassé du premier culot contenant les débris cellulaires et noyaux), ils centrifugent à 15000g pdt 5min. Tu récupères ainsi les mitochondries, les peroxysomes et les lysosomes. Ensuite, à toi de jouer pour isoler les mitochondries en utilisant par exemple un marquage immunofluorescent.  [...]