• Forum - Manipulations, Extraction, ARN, Activités

Extraction ARN totaux

Personellement, j'utilise les kit QIAGEN pour effectuer mes extractions. Cette méthode consiste à capturer les ARN totaux sur une colonne et de la nettoyer par la suite. La dernière étape consiste à récupérer les ARN dans de l'eau RNase free. Tu peux effectuer ton dosage par la suite sans soucis.  [...] Bonjour, excusez-moi de m'insérer dans votre discussion mais j'avais une autre question en fait. J'aimerai savoir à quoi servent toutes les manipulations lorsqu'on fait une extraction d'ARN et quelles sont les activités des différents produits utilisés comme le Trizol, le chloroforme, l'isopropyle.  [...]

Petite énigme à vous soumettre...

.. 20.000 manipulations Avec assez de cultures cellulaires pour chaque expérience, extraction des seconds messagers, révélation des protéines... Est-ce bien réalisable.  [...] De plus, je me permets une remarque sur ton idée de radiomarquage, qui ne me semble assez chère aussi, et la seconde méthode, avec le second messager, qui, si testée indépendamment avec chaque molécule, sous-entend... 20.000 manipulations Avec assez de cultures cellulaires pour chaque expérience, extraction des seconds messagers, révélation des protéines... Est-ce bien réalisable.  [...]

[Génétique] Transcription inverse

- La RNAse OUT (nom commercial) est un inhibiteur des RNases, ces enzymes qui dégradent les ARN et ne sont donc pas souhaitables dans ces manipulations.  [...] Le tampon RT, comme son nom l'indique, est là pour tamponer la solution au pH adapté à l'enzyme. Il contient aussi des sels, nécessaires à son activité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manipulation de laboratoire - Extraction d'ARN

J'étudie l'effet des corticostéroïdes utilisés pour traiter l'ostéoarthrite sur ces ménisques. Dans mes manipulations, je tente d'extraire l'ARN des cellules méniscales dans le but d'analyser si des gènes tels que ceux du collagène ou de l'aggrecan subissent une modification de leur expression.  [...] Voilà les détails. Maintenant, en pratique, j'extrais l'ARN en utilisant le protocole du Tri-Réagent (par Sigma-aldrich). Mon problème est tout à la base de la manipulation. je n'arrive pas à transformer les ménisques en solutions. J'ai tenté de les mettre dans l'azote liquide et de les broyer avec un pilon mais ils sont tellement dur que ça durcit encore plus mais ça ne se casse pas en poudre.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

Je suis en train de rédiger un rapport d'un travail pratique. J'ai quelques doutes sur ma compréhension de chaque étape des manipulations et techniques effectuées en laboratoire.  [...] Je viens vous présenter de nouvelles questions, au sujet de manipulations que nous avons faites juste après avoir extrait, purifié et analysé notre ARN (voir premier post).  [...]

[Microbiologie] Antibiogramme pour tester l'activité de nouvelles molécules.

Bonsoir à tous, j'espère que vous passez une bonne fin de weekend. Je suis entrain d'élaborer un protocole pour tester les activités antibactériennes de molécules que j'ai synthétisées. Mes principales références sont les recommandations de la société française de microbiologie, comité français de l'antibiogramme 2015.  [...] Salut. J'adhère à ta méthode, mais j'ai synthétisé juste la quantité qu'il faut pour tester 4 activités. Ta méthode semble consommer trop en quantité de substances, vu que je dois faire les manipulations 4 fois pour l'analyse statistique. Je voudrais plutôt élaborer un protocole pour tester la sensibilité en microplaques.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

J'ai eu un TP sur l'activité enzymatique de la phosphatase alcaline. Il y a eu plusieurs manipulations (avec et sans inhibiteur), et avec les résultats d'absorbance qu'on a mesuré, on doit déterminer le Km et le Vmax à partir de différentes méthodes de linéarisation (Lineweaver & Burk, Eadie & Hofstee et Hanes).  [...] Focalisons-nous par exemple sur la méthode de Lineweaver & Burk (ordonnée en min/dA et abscisse en 1/millimolaire) pour une réaction sans inhibiteur.   [...]

[Biotechnologie] Laboratoire de Biochimie-Microbiologie

L'année passée, aux laboratoires de biochimie, nous avons fait des manipulations comme des Extractions de lipides au Soxlhet, dosage du Cytochrome C dans un coeur de boeuf... Et quelques uns avaient déjà du faire l'une ou l'autre manipulation en trouvant eux-mêmes un protocole.  [...] Comme nous n'en avons pas encore fait, et qu'il faut que cela soit réalisable avec le matériel qu'on a sous la main, nous pensons vite à des manipulations classiques... Et c'est vrai que souvent, au final, on obtiens un produit finis.  [...]

[biochimie] activité spécifique d'un enzyme selon la concentration

Si tu as 50% de l'activité spécifique tu as donc 50% des enzymes qui t'intéresse dans l'échantillon et 50% d'enzymes que tu aimerais t'en débarassser. Le but étant par exemple de mesurer l'indice de purification d'une technique ou tout simplement vérifier qu'on a un échantillon de protéines qui est le plus pur possible pour divers manipulations,études.  [...] Tu as raison. l'activité spécifique étant une activité exprimée par mg de protéines généralement. donc pour un même extrait enzymatique, l'expression de l'activité spécifique ne changera pas puisque l'activité augmente de manière proportionnelle à la quantité d'enzyme et que c'est un rapport.  [...]

Virus et carottage dans les poles

Par exemple lors de l'extraction d'une carotte, est ce que cela se fait sous atmosphère contrôlée ou non Leur manipulation est elle aussi méticuleuse que dans un labo P4, leur acheminement etc.  [...] Tu trouveras, sur ce site, des détails sur les extractions du lac Vostok, un forage des plus intéressant en paléoclimatologie. Les chambres dans lesquelles ont entasse les carottes sont, en moyenne, à une température de -23 celsius. Pour les labo p4 on repassera, mais il est vrai qu'un minimum de sécurité, de rigueur dans les manipulations est requise pour éviter la contamination des échantillons.  [...]