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[Biochimie] Question protéine

Pour moi les notions de valeur biologique des protéines et de grandeur d'une absorption n'ont aucun sens. Ni l'une ni l'autre. Je ne comprends donc même pas comment vous avez pu répondre à votre première question.  [...] L'absorbance mesurée par spectrophotométrie à la longueur d'onde adéquat permet de déterminer la concentration de protéines dans un échantillon donnée.  [...]

[Biochimie] Spectrophotomètrie : Les différentes technologies...

spectrophotometre. il émet sur une plage de longueurs d'ondes (ou sur une LO spécifique) et détermine l'absorbance de l'échantillon en fonction de la longueur d'onde. Tu obtiens un spectre d'absorption de ton échantillon. renseigne sur la pureté, la concentration d'une substance.  [...] la longueur d'onde d'émission). Cela permet de quantifier un échantillon capable d'émettre en fluorescence. EX. tu veux quantifier une protéine genre GFP. Tu programmes ton fluo pour qu'il excite a 488nm et tu mesures les photons émis en fluorescence par la GFP a 505nm, proportionnels à la quantité de GFP.  [...]

calcul de concentration

je souhaiterai savoir comment calculer la concentration en protéine (mitochondries) à partir d'une courbe étalon avec la BSA.  [...] une courbe-étalon c'est l'absorbance en fonction de la concentration. Donc tu mesures l'absorbance de ta solution de protéine et tu détermines la concentration en reportant ta valeur sur la courbe-étalon. Donc tu la détermines graphiquement. Mais attention de faire ta mesure d'absorbance à la même longueur d'onde que ta courbe-étalon a été déterminée.  [...]

spectrophotométrie

Donc, si tu sais que ton échantillon est de la protéine pure, et que tu a le coeficient d'absorption des protéines à 280nm tu en déduis la concentration de ton échantillon en protéines (enfin, l'ordinateur la calcule pour toi, en l'occurence).  [...] Attention si tu as dans ton échantillon des produits qui absorbent aussi la lumière à 280 nm ta mesure en sera faussée, tu sur-estimera la concentration, car le spectrophotomètre ne différencie pas les produits entre eux, c'est juste une mesure globale.  [...]

[Biologie Moléculaire] Densité Optique a quoi sa sert en biologie ?

Les mesures de DO sont aussi utilisées en biologie pour mesurer des concentrations de protéines, suivre des réactions enzymatiques ou encore des croissances bactériennes ou de levures en milieu liquide par exemple, le tout étant de savoir quelle longueur d'onde regarder pour tel ou tel contexte.  [...] Cas concret. en thèse, je produisais une protéine recombinante qui a la capacité de se lier aux ARNt. A la fin de ma première étape de purification (une colonne Ni-NTA), mes échantillons absorbaient principalement à 260 nm, preuve que ma protéine était très liée à des acides nucléiques (= les ARNt).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN

petite précision, l'ADN absorbe les UV a 260 nm, donc je suis sur de la longueur d'onde que j'ai choisi pour la lecture de la densité optique.De plus je trouve que l'expression de la concentration se fait par microlitre indépendamment du volume final du moment que chaque ul contient une quantité donné d'ADN.  [...] Et tant qu'on y est sur les précisions, il est exact que le pic d'absorption des acides nucléiques, aussi bien ADN que ARN, est à la longueur d'onde 260nm, mais les protéines absorbent aussi à 260nm même si leur pic est à 280nm. C'est la raison pour laquelle on mesure les deux et que le ratio doit être proche de 2 pour indiquer une bonne pureté en protéines.  [...]

adn et arn

formule qui permet à partir de la densité optique de trouver la quantité d adn ou d arn dans un tube. merci de me donner une idee que je vais suivre.   [...] Pour connaitre ta concentration d'ADN, la longueur d'onde du spectrophotomètre doit réglé à 260 nm.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage methtrexate au spectrophotometre

[Biologie Moléculaire] Dosage methtrexate au spectrophotometre.   [...] A quelle longueur d'onde et jusqu'a quelle concentration molaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

En fait les anti-corps se fixent sur les protéines et après centrifugation on peut extraire les protéines. C'est bien ça l'utilité de l'immunoprécipitation.  [...] Le Sds est un détergent ionique qui donne aux polypeptides une charge négative uniforme par unité de longueur. Les charges propres de la protéines n'interviennent alors plus. La charge de l'ensemble molécule dénaturée/SDS (et donc sa vitesse de migration) dépend alors uniquement de la longueur de la chaine protéique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquençage et métabarcoding

Soit il y a une seule plante dans l'échantillon. après amplification par PCR, vient le séquençage. J'ai vu qu'il existait plusieurs types de séquençage. pyroséquençage, séquençage par synthèse,... qui diffèrent par le nombre de fragments obtenus, la longueur des fragments, le taux d'erreur, le coût d'analyse par séquence.  [...] Cela signifie que, en ne connaissant pas notre échantillon, les amorces vont quand même matcher (puisqu'universelle) et permettre une amplification. Le but étant de séquencer la zone d'intérêt (avec les même amorces). L'identification de l'espèce se fait après le séquençage, non pas selon la longueur du fragment amplifié, mais bien selon sa séquence.  [...]