• Forum - Localisation, Structure, Protéine

[Biochimie] Poids plus élévé après digestion enzymatique

tu sais quel est le profil que tu dois obtenir après digestion si c'est un produit PCR c'est linéaire. Tu n'as qu'un fragment apres digestion C'est pas du a une structure de repliement.  [...] Concernant ta mutation, impossible de répondre. Ca peut très bien n'avoir aucune incidence sur la fonctionnalité de la protéine comme ça peut la rendre totalement inopérante. Le point critique c'est la localisation de cette substitution dans la structure 3D de la protéine.  [...]

[Biochimie] Protéine hydrophile ou hydrophobe ?

Disposes tu d'informations sur la structure tertiaire de ta protéine connais tu sa localisation dans la cellule ou dans l'organisme quelle est cette protéine.  [...] connais tu les compositions en AA de tes hélices et feuillets et connais tu leur orientation (localisation) dans la structure tertiaire.  [...]

[Biochimie] Identification et caracterisation de protease

N'etant pas specialiste en biochimie, je me heurte a un probleme d'identification et de characterisation de protease. La problematique est la suivante.  [...] Pour les anticorps, tu ne peux pas t'aider de sa capacité à cliver les protéines virale de fusion pour connaitre un peu comment est sa structure et trouvé un anticorps qui puisse être complémentaire à celui-ci (tu pourrais ainsi vérifier par immunomarquage si cette protéine est bien celle que tu cherche par sa localisation intracellulaire ^^).  [...]

[Biochimie] Extraction protéique au laemmli ?

J'ai une petite question sur une manip que je fais en ce moment. J'étudie une protéine sur laquelle j'ai fait quelques délétions pour caractériser un peu mieux ces fonctions. J'ai transfecté les plasmides dans des HeLa, extraction des protéines au RIPA, migration et WB.  [...] Afin de voir si elle était exprimé, j'ai regardé en immunofluorescence, et j'ai un signal pour cette protéine. Donc elle est bien exprimé dans mes cellules. Par contre, la localisation de la protéine change et se retrouve dans des structures nucléaires (genre aggrégats).  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine Iba-1: localisation intracellulaire ou membranaire chez la microglie?

Depuis un moment maintenant, je me pose la question de la localisation de cette protéine Iba1 (ionized calcium binding adaptor molecule 1) au niveau des cellules microgliales. Connu pour être l'un des marqueurs spécifiques de ces cellules et des macrophages, j'aimerai vraiment savoir dans quel compartiment elle se trouve.  [...] En dehors de la localisation de son gène, je n'ai pu trouver aucune information concernant la protéine. Je n'ai également rien trouvé sur des publications.  [...]

Différence de fixation des cellules

Et c'est un peu la même chose pour la perméabilisation. Donc je suppose que cela dépend de la structure et de la séquence de l'Ab et de la manière dont il réagit avec le fixateur. Pour la localisation des protéines c'est pareil, on peut voir des localisations différentielles selon le fixateur.  [...] Avec le methanol, la fixation s'effectue par deshydradation (denaturation des proteines) alors qu'avec les aldehydes (formaldehyde, glutaraldehyde) on conserve la structure 3D de la proteine (fixation par pontage). Donc effectivement, si tu utilises un anticorps conformationnel, la detection de ton antigene sera impossible apres une fixation en methanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gènes et protéines

C'est une définition qui, pour moi en tout cas, englobe tout le reste. on a la structure d'un gène ( = partie du génome, que ce dernier soit ADN ou ARN), on a sa fonction ( = il est transcrit en un ARN). Je la trouve juste (sans pour autant dire il n'y a que celle-là, les aut' c'est de la m*rd* ) parce qu'on peut l'éteindre à tous les organismes.  [...] Comme un gène contient le plan de construction d'une protéine. et s'il code pas de protéine, c'est pas un gène Pareil pour la localisation au sein de la cellule. pour les Eucaryotes, ça va, mais le reste du monde vivant.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

La protéine dont je devrait étudier les partenaires provient d'un procaryote et possède un signal peptide de localisation périplasmique. Je dois donc faire une protéine recombinante du côté C-Terminal, puisque la séquence sera clivée. Cela est-il possible.  [...] Pour le double hybride, est-il possible de l'effectuer avec une protéine possédant un signal peptide de localisation périplasmique Celui-ci ne sera pas coupé.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage par Ac-FITC : du solide ?

Après la période d'incubation, j'aurais ajouté un anticorps anti-[protéine récherchée]. puis un second anticorps marqué au FITC et dirigé contre l'anticorps du complexe précédent.  [...] je ne pense pas que tu aies le choix. Quelle est la localisation cellulaire de ta protéine En immuno généralement on fixe les cellules puis on les perméabilise pour donner accès aux anticorps. Autre chose. ce type d'approche n'est que peu quantitatif.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage GFP

si tu couples ta protéine d'intéret à la GFP, tu peux la suivre dans la cellule, qd elle se ballade du noyau au cytoplasme par exemple.  [...] Tu n'introduis pas la GFP seule, mais un gène codant une protéine de fusion GFP. Ainsi, ta protéine d'intérêt et la GFP étant lié covalement, en suivant la localisation de la GFP tu suivras la localisation de ta protéine d'intérêt.  [...]