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Vaccin hépatite B - Page 4

Les protéines obtenues sur milieu de cultures synthétisées par les cellules CHO DFIRF positives sont fitrées et concentrées puis fractionnées par le polyéthylène-glycol ce qui permet l'élimination des protéines et des particules rétrovirales.  [...] 3- Purification de la protéine, éliminant toute trace de cellules productrices, de virus, de produits de dégradation de la protéine, de milieux de culture.  [...]

Comment lire un Western blot : pourquoi fait-on telle manip ?

Par exemple, dans cet article, on transfecte des cellules provenant d'une lignée COS avec des plasmides (pcDNA3) contenant la séquence d'une protéine rebaptisée XY qui serait impliquée dans la migration cellulaire. Je vous joins une image s'y rapportant.  [...] 4) Toujours dans cette figure C, à quoi correspond les colonnes Lysates et XY Lysates correspond-il à la bouillie de cellules Si c'est le cas, mais on a immunoprécipité XY, non Quelle est la différence avec la colonne XY D'ailleurs, c'est quoi cette colonne.  [...]

[Biologie Moléculaire] pax3-krab

voilà je dois lire un article en vue d'un examen sur le rhabdomyosarcome et dans ce texte on dit que la protéine fusion (PAX3-KRAB) convertirait les cellules de rhabdomyosarcome de lignée RH30 à un phénotype anchorage dependant Pouvez vous m'aider si la signification de ces termes Merci beaucoup.  [...] je suis vraiment pas spécialiste de la manipulation de cellule en boite, mais il me semble que les cellules anchorage dependant se fixent sur un support lorsqu'on les cultive dans une flasque.  [...]

Courbe de croissance cellules immortalisées

J'ai une question concernant la mort des cellules immortalisées. Voilà j'ai mis en culture des fibroblastes embryonnaires murin immortalisés et fait une courbe de croissance avec le test au MTT sur 7 jours. Une fois arrivée à confluence la courbe de ma lignée KO pour une protéine importante de la mitochondrie décroit tout de suite.  [...] Il n'y a pas de plateau comme observé sur ma lignée sauvage. Alors je voulais savoir combien de temps les fibroblastes immortalisés pouvaient rester à confluence sans mourir et de quelle mort s'agit-t'il On m'a dit que c'était une mort cellulaire programmée mais pas une apoptose.  [...]

siRNA et pénétration / ARNsi

Pour generer des lignee stables exprimant des siRNA, il existe des systemes retroviraux (pSiren si je me rappelle bien). Je ne comprends pas bien ce que vient faire la lpenetratin dans ce cas. La penetratin peut etre utile pour faire entrer des peptides (tout comme le peptide fusogene de la proteine Tat de HIV) voire des proteines recombinantes dans des cellules.  [...] En fait, j'aimerais introduire ce siRNA qui fonctionne en transitoire de manière stable dans une lignée cellulaire. Les siRNA sont la grande tendance, et beaucoup de fournisseurs proposent leur plasmide qui est dit être le top of the top. J'en ai testé un en faisant varier les conditions et je ne retrouve pas les effets du transitoire.  [...]

[Biotechnologie] La p60 Du virus sarcome de roux

Je n'est pas bien saisi pourquoi la protéine P60 du virus sarcome de roux doit s'associer à la membrane cellulaire pour que celle ci subit une transformation en une lignée immortelle.  [...] Si c'est possible y a t'il quelqu'un qui connait la raison bien précise.   [...]

[Génétique] Production d'interleukine 2

L'Il2 étant sécréter, cela va te simplifier la vie... Après ta sélection, tu peux prendre ton surnageant de culture, le concentré un peu (centricon) et réaliser une analyse par électrophorèse SDS PAGE ou encore mieux en western blot afin de valider que tes cellules produisent ta protéine.  [...] Tu valides sur gel ou par western blot, et voilà. après plusieurs semaines de dur labeur tu as produit ta protéine. Il ne te reste plus qu'à en tester l'activité sur une lignée cellulaire sensible à l'IL2.  [...]

Gène Syncytine

Pour l'histoire des conséquences. vous voulez voir ce que fait votre proteine, sauvage ou mutée. il faudra la faire s'exprimer dans un modèle et en mesurer les effets, pour cela il y a le choix. lignée cellulaire, modèles animaux, etc.  [...] pour la sous expression. il s'agit par exemple d'utiliser un sh ou siRNA dans des cellules pour empecher l'expression de la protéine, voire de faire des modèles animaux KO.  [...]

cellules mésenchymateuses/progénitrices

Dans mon cours d'histologie on nous indique que les ostéoclastes dérivent de cellules progénitrices, tandis que les ostéoblastes de cellules mésenchymateuses. Mais une cellule mésenchymateuse n'est elle pas également une cellule progénitrice.  [...] Désolé pour la réponse tardive. C'est faux, les ostéoclastes dérivent de cellules de la lignée monocytaire-macrophagocyte, et sont en fait le résultat de la fusion de plusieurs cellules de cette lignée qui forment un syncytium. Les ostéoblastes, en revanches, dérivent des cellules ostéoprogénitrices, qui sont des cellules souches bipotentes présentes dans le périoste et l'endoste.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dominant négatif

Alors en fait si j'ai bien compris c'est au niveau génétique que ça se passe, on va modifier le gène de cette protéine de sorte que toutes les protéines produites seront non fonctionnelles donc on peut apparenter ça a un KO mais comment fait on cette manipulation concrétement j'ai une lignée cellulaire qui surexprime une protéine et je veux l'inhiber pour en étudier les effets quelle est la marche à suivre au point de vue technique.  [...] Ta protéine va être largement surexprimée (d'où le terme de dominant) par rapport à la forme sauvage et les signaux extérieurs (ligand si c'est un récepteur,...) vont reconnaître la protéine mutée qui est majoritaire à la surface de la cellule. Cependant, la cellule ne pourra pas répondre au stimulus vu que ta protéine est tronquée (d'où le terme négatif).  [...]