• Forum - Levure, Protéines, Clonage

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Ok, mais le but est bien d'étudier le protéome de la levure Donc pourquoi utilise t il des protéines de fusions et ils réalisent un clonage mais c'est bien 5800 protéines différentes de la levure qu'on étudie sinon pourquoi parle t on de protéome.  [...] Le clonage est la façon la plus simple pour produire, purifier et accrocher 5800 protéines. Donc le clonage a été réalisé 5800 fois sur 5800 protéines différentes. Puis ils ont réalisé 5800 bouillon de culture pour produire les 5800 protéines, qu'ils ont ensuite purifiées (grâce à l'étape du clonage).  [...]

[Biochimie] clonage et expression de gènes chez la levure

voila comme je ne suis pas très fort en biologie moléculaire, je me demande pourquoi effectue-t-on le clonage et l'expression des gènes plutot chez la levure que la bactéire.  [...] la levure est un eucaryote. du coup ca offre beaucoup d'avantage quand tu t'interesses a des protéines qui sont modifiées posttraductionnellement par expl.  [...]

système de double hybride

Les protéines hybrides sont des protéines qui comportent au minimum deux séquences protéiques d'origine différentes. Dans notre cas, un des GAL4 de la levure va être fusionné à une protéine humaine. On obtient alors une protéine chimère, que l'on ne trouvera pas dans la Nature.  [...] Pour le test en lui même, on met nos deux protéines chimères ensembles, on attends qu'elles soient exprimées par la levure, puis qu'elles interagissent entre elles (ou pas). S'il y a interaction entre PCR-1 et AST-1, les deux protéines GAL4 seront alors assez proche pour activer la transcription du gène rapporteur.  [...]

[Biochimie] Purification des proteines Linases dans la levure

je suis en etudiante en biologie et je prepare actuellement ma licence. Le theme sur lequel je travaille est la purification des proteines kinases (proteine Kinase A) dans la levure.  [...] En resume la proteine kinase Tpk2 doit etre clonee dans pET19b et ensuite exprimee et purifiee dans la levure(Cereviseae).J avais deja essaye d exprimer et de purifier cette kinase dans Bl21 mais la dite kinase n est pas active dans BL21...Et mon probleme est que je ne sait pas vraiment comment exprimer et purifier cette kinase dans la levure.  [...]

les prions

Sinon il existe des proteines ayant les meme caracteristiques dans d'autres organismes, PSI+ et URE3 chez la levure Saccharomyces cerevisiae par example.  [...] On ne sait pas trop, mais des travaux effectués sur la levure, indique que le stress est une possibilite en agissant au niveau des proteines HSP qui justement ont pour role d'assurer le repliement normal des proteines.  [...]

pour les levuristes

est ce que qq'un pourrait me donner le poids moléculaire du tag 3xHA De plus je voudrais savoir si l'un d'entre vous a déja réaliser des transformations de levure avec des produits de PCR qui permettent d'intégrer des tags au génome de la levure car pour moi, soit aucune levure ne pousse soit les protéines taggées ne sont pas exprimées.  [...] Tu es sur que tes oligos sont bien dans la bonne phase de lecture par rapport au tag.   [...]

[Biologie Moléculaire] clonage moléculaire

bonjour à tous, lors d'un clonage moléculaire, avec pour cellule hôte, une levure (c.eucaryote), comment on procéde pour intégrer notre ADN insert dans cette levure...autrement reformulé. comment procéder pour transformer notre insert dans la levure.  [...] Tu ne mets pas comme ça ton insert ds la levure. Il faut passer par l'internmédiaire d'un vecteur par exemple un plasmide mais la nature du vecteur peut changer selon la taille de l'insert ou la nature de l'hôte récepteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sequence a ajouter avant un site de restriction

Je me lance dans le clonage d'un gène, que je vais amplifier a partir d'ADN génomique de levure (le gène ne contient pas d'intron).  [...] Afin de pouvoir le cloner dans mon vecteur d'expression, je dois ajouter un site de restriction en 5' et en 3'.   [...]

Vaccin hépatite B - Page 3

Si la purif n'est pas complète tu auras juste des protéines de levure de bière en plus... c'est pas un pathogène bien méchant, hein.  [...] Le système immunitaire marche plus ou moins selon les pathogènes. certains pathogèens peuvent avoir une forte variabilité (grippe, HIV, malaria...) ou peuvent mimer des motifs moléculaires de l'hôte. D'autres encore sont susceptibles d'interrompre certaines cascades en inactivant des protéines du complément, interrompant la synthèse protéiques cellulaire, empêchant la réponse interféron.  [...]

[Biologie Moléculaire] identification d'un gène

Ensuite, il me faudra faire exprimer ces deux vecteurs dans deux cultures bactériennes (ou de levure, en fonction du caractère plus ou moins capricieux des protéines eucaryotes), purifier ces protéines sur billes d'agarose couplées au glutathion et analyser ce qui sort.  [...] Les protéines de haut poids moléculaire (. 75 kDa) se révèlent souvent difficiles à analyser. La raison en est, la plupart du temps, une quantité/qualité d'échantillon insuffisante. Pour ce type de protéine la purification, la séparation et le transfert doivent faire l'objet d'un soin particulier.  [...]