• Forum - Introduction, Plasmide, Bactérie

[Evolution] Positions actuelles sur la théorie de l'évolution

la simple introduction d'un plasmide autoréplicatif à l'intérieur de la bactérie entraine le changement phénotypique.  [...] SI tu as un taux de mutation de un sur un million, ça veut dire que en moyenne, chaque base mutera une fois sur un million de générations. Ça paraît beaucoup, mais sais-tu combien de bases compte un génôme de bactérie.  [...]

cellules competentes

est ce que quelque un aurait des informations sur les cellules beta compétente de e coli.   [...] On dit que des bactéries sont compétentes lorsqu'elles présentent des trous dans leur membrane qui leur permet d'intégrer de l'ADN exogène. Ces bactéries sont notamment utilisées dans le contexte de transformation bactérienne, c'est-à-dire de l'introduction d'ADN (souvent sous la forme de plasmide), pour l'amplification de ce plasmide.  [...]

principe de transformation des levures?

Si c'est ça le principe est pas trop compliqué,tu introduit un plasmide bactérien modifier compartant le géne que tu veux introduir dans ta cellule qui aurra préalablement était rendu perméable grace à un tampon ( enfin je crois que c un tampon. non).  [...] pour ceux qui est du plasmide l'introduction du géne se fait a l'aide d'enzymes de restriction spécifique qui coupe ton plasmide au niveau des séquence souhaiter et tu peux ainsi introduir ton géne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage Gateway...intérêt ?

- un premier intérêt est celui que tu dis. tu n'utilises pas d'enzymes, pas besoin de choisir 2 enzymes différentes, de déphosphoryler le plasmide, phosphoryler les primers...ect... une simple PCR suffit pour l'obtention de ton gène avec les séquences nécessaires à l'introduction dans le plasmide.  [...] -lors de la transformation, tes bactéries qui vont pousser sur pétri ont beacoup plus de chance de posséder ton gène d'intérêt car tes plasmides n'ayant pas recombinés possèdent un gène suicide.  [...]

[Biologie Moléculaire] si et shRNA

Voilà, j'ai une petite question à propos des siRNA et des shRNA, je ne vois pas bien leur différence... en fait, il m'a semblé comprendre que les siRNA étaient utilisés pour une transfection transitoire alors que les shRNA pour une transfection stable (du fait qu'ils sont introduits sous forme double brin) Et pour transfecter une cellule avec un sh ou un siRNA, faut-il les introduire dans un plasmide Et peut on utiliser les mêmes moyens de transfection pour les deux Enfin, c'est un peu confus dans ma tête.  [...] -les shRNA sont introduits via un vecteur (plasmide ou virus) donc introduction dans le génome de la cellule et ne se perd donc pas lors des divisions cellulaires.  [...]

siRNA et pénétration / ARNsi

J'ai testé un plasmide sans grand resultat c'est pour quoi je m'interesse à la penetratin. Est ce quelqu'un connait et a de l'expérience dans ce domaine ou alors connait un bon système d'introduction.  [...] En fait, j'aimerais introduire ce siRNA qui fonctionne en transitoire de manière stable dans une lignée cellulaire. Les siRNA sont la grande tendance, et beaucoup de fournisseurs proposent leur plasmide qui est dit être le top of the top. J'en ai testé un en faisant varier les conditions et je ne retrouve pas les effets du transitoire.  [...]

[Microbiologie] TP:isolement des bactéries à partir de l'air

mon travail là est de rédigé un compte rendu dans je vais faire une introduction qui a rapport avec le tp(alors là je vais parlé des bactérie n'est ce pas.).  [...] Puis essayer d'expliquer ce qui s'est passé pendant ta manip. A quel moment sont arrivés ces organismes (pendant l'ouverture air libre ou pendant l'incubation 24h et quelle expérience faire pour vérifier que c'est à une étape et à pas l'autre que les bactéries sont arrivées) Mon milieu permet-il de cultiver toutes les bactéries de l'environnement S'agit-il uniquement de bactéries Autant de questions qu'il faut que tu te posent et soit tu essayes d'y répondre, soit tu poses la question directement en ouverture de ta conclusion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Internalisation / FRET

Si je marque une cellule avec la GFP(introduction d'un plasmide portant la GFP) et l'autre avec la DsRED, est ce que je visualiserais un signal jaune si la cellule exprimant la GFP est internalisée par la cellule exprimant DsREd.  [...] Les sondes étant lipophiles elles vont marquer tout l'intérieur de la cellule, et si il y a un phénomène d'internalisation alors je vais avoir une fluorescence jaune que je peux detecter par cytométrie de flux. Ai je bien compris.   [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Sinon, si ça ne fonctionne pas, tu peux ouvrir en NdeI BamHI (Tu vires ton XhoI du plasmide). Dans le même temps tu commandes des oligos complémentaires qui commencent par NdeI et BamHI et qui contiennent XhoI un peu à distance de BamHI. Tu digères NdeI BamHI et tu ligues.  [...] Piwi, technique élégante, petite question. le vecteur avec le MCS modifié, tu l'amplifie en bactérie avant de refaire la digestion par XhoI, ou bien tu enchaines les différentes étapes, car si tu amplifies en bactérie, comment fais tu pour discréminer un clone avec un MCS modifié d'un clone avec le MCS normal La différence de taille après digestion par d'autres enzymes ne me semblant pas vraiment jouable, je pencherai plus sur l'introduction d'un nouveau site de clivage non présent dans le vecteur, ce qui facilitera le screening pour trouver les clones modifiés.  [...]

urgent: recombinaison chez les bactéries

salut, pour les recombinaisons homologues ches les bactéries, elles sont basées sur l'homologie des séquences entre l'ADN exogène et l'ADN de la bactérie receptrice, c'est des régions d'environ 200pb similaire entre les deux ADN, c'est une sorte de reconnaissance, un prérecquis pour la recombinaison et l'introduction d'une molécule d'ADN exogène.  [...] merci d'avoir essayer de repondre, j'ai beau chercher dans le net, les bouquins, les articles...y a pas de précision. je voulais aussi savoir si quelqu'un à des exercices sur la transformation, conjugaison ou transduction. j'essayerai de les faire avec vous. merci d'avance.   [...]