• Forum - Intérêt, Réaction, Séquence

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

- La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] co transfection??

Vous transfectez votre vecteur codant pour votre facteur de transcription avec un autre vecteur portant, lui, une séquence promotrice sur laquelle peut se fixer votre protéine d'intérêt et codant pour une protéine rapportrice dont vous quantifierez la présence de la manière qui vous semblera la plus appropriée (dosage d'activité enzymatique, ELISA, réaction colorée, etc...).  [...] en calculant le rapport B/A, tu peux avoir un reflet de l'activité transcriptionnelle de ton promoteur et tester l'influence de mutations sur certaines séquences que tu supposes impliquées dans la régulation transcriptionnelle.  [...]

[Biologie Moléculaire] amorces PCR et séquençage

qqun pourrait-il me dire si on peut utiliser des amorces de PCR pour vérifier par séquençage la présence correcte d'un transgène après transfection je précise que les amorces marchent très bien en PCR et révèlent que le gène d'intérêt est bien là mais peut-on utiliser ces mêmes amorces ensuite dans une réaction de séquence.  [...] on ne le fait peut être que rarement parce qu'on préfère séquzencer la région d'insertion également, donc on préfère une amorce placée un peu en amont.   [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

Le choix de la durée des cycles de température et du nombre de cycles dépend de la taille de la séquence d'intérêt ainsi que de la taille et de la complémentarité des amorces. Il convient de réduire les durées au minimum non seulement pour un gain de temps mais aussi pour prévenir le risque d'amplification non spécifique.  [...] Le produit d'une PCR est constitué d'un ou de plusieurs fragments d'ADN (la ou les séquences d'intérêt). La détection et l'analyse des produits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

je ne comprends pas comment ça se fait que si on place un gène rapporteur à la suite d'une séquence régulatrice on va alors avoir la localisation du rapporteur(GFP) de notre gène d'intérêt.  [...] si je comprends bien, si l'on veut connaitre la localisation de la protéine d'intérêt avec une séquence régulatrice(recombinaison homologue), il faut forcément que le transgène possède une séquence d 'ADN de localisation (ex.NLS qui soit identique à la séquence d'ADN de localisation de la protéine d'intérêt) et le gène rapporteur.  [...]

[Biochimie] Question sur la biotechnologie

Le criblage te permet de retrouver ta séquence d'intérêt dans une banque. En effet une banque est très vaste (environ 3000 clones pour couvrir le génome de E. coli et presque 100 000 pour couvrir le génome de D. melanogaster ) donc on a besoin d'une méthode qui identifie en une seule fois le ou les clones qui portent la séquence d'intérêt.  [...] Donc si je résume, le criblage d'une banque me permet de retrouver la sequence du gène d'intérêt, par exemple par marche chromosomique ou comme tu viens de le dire par hybridation.  [...]

[Génétique] Comment identifier les promoteurs contenant une sequence consensus d'intéret

Je connais la séquence consensus d'un facteur de transcription. J'aimerai identifier dans le génome humain l'ensemble des promoteurs qui possédent cette séquence.  [...] - Sinon il y a la DBD. Transcription factor prediction database, mais pas sûr qu'il s'agisse de FT décrits expérimentalement.   [...]

Isoler une région d'un génome à partir d'un BAC

Mon problème. Je veux isoler une région de quelques Kb, englobant un gène d'intéret, à partir d'un BAC dont la séquence est connue.  [...] En d'autres termes, comment faire pour isoler une région de 10 kb environ, (amont du gene d'intéret + gene d'intéret + aval) à partir d'un BAC ( on connait la séquence complète du BAC ).  [...]

[Biotechnologie] Bioluminescence par bactéries recombinées

A partir d'un vecteur (plasmide, yac, bac...) vous transférer la séquence d'intérêt depuis la bactérie naturellement luminescente. POur se faire, clivez la séquence d'intérêt à l'enzyme de restriction adaptée (il y en a à foison selon les coupes franches ou cohésives).  [...] Je pense aussi que pour completer le tout sur comment elle peut réponse aux métaux, il faut je pense se referer à la régulation de l'opéron fer qui code pour la ferritine ( il me semble ) et qui répond au fer grace a des sequence Iron Responsive.  [...]

OGM - Clonage d'un gène / Construction du trangène

Par ailleurs pour créer un OGM il va aussi falloir créer un transgène, c'est à dire notre séquence d'intérêt mais aussi y ajouter un promoteur, éventuellement des séquences régulatrices et tout ca. Mais comment se fait cette étape la Et une fois que l'on a formé notre transgène, il faut de nouveau utiliser un vecteur pour remultiplier notre séquence d'intérêt.  [...] Je comprends pas bien en quoi le clonage du gène est intéressant. Puisque on pourrait théoriquement formé notre transgène, l'inséré dans un vecteur qui se multiplie et ainsi avoir une grande quantité de séquence d'intérêt sans passer par le clonage.  [...]