• Forum - Intérêt, Réaction, Amplification

[Biologie Cellulaire] Rt-pcr

pour la méthode RT-PCR, quel est le principe de la rétrotranscription et quelle est son interet pour la réaction d'amplification PCR.  [...] La RT-PCR a été mise au point pour utiliser les ARN comme matrice d'amplification de la PCR. Elle est certainement la méthode la plus sensible pour détecter (et éventuellement quantifier), les ARN messagers au niveau d'un organe, d'un tissu ou d'une cellule.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

En quoi est-il utile de modifier les températures La première étape sert-elle à favoriser la RT (60 minutes, on a de quoi être sûr que tout soit bien RT ) La deuxième étape (72°C) est-elle une phase d'amplification de l'ADNc (que se passe-t-il avec les brins hybrides à cette température).  [...] Before a subsequent amplification reaction, contaminating PCR products are degraded using uracil-DNA glycosylase. The enzyme is inactivated at the beginning of the amplification reaction by heating to 95°C. Simultaneous strand cleavage of the U-DNA is achieved during this heating step.  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

effet, si la séquence d'intérêt est présente dans l'extrait d'ADN, il est possible de sélectivement la répliquer (on parle d'amplification) en très grande.  [...] la réaction d'amplification peut se réduire à une copie unique. La quantité maximale ne peut en aucun cas excéder 2 ¼g. En général, les quantités utilisées se situent dans une gamme comprise entre 10 et 500 ng d'ADN matriciel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage Gateway...intérêt ?

-les passages du gène d'intérêt dans le premier vecteur et le passage du premier vecteur au second, ne nécessitent pas d'amplification PCR avec la Taq... donc pas d'incorporation d'erreur de nucléotide par cette enzyme.  [...] Cependant il y a encore un petit détail qui m'échappe...quand tu dis qu'il n'y a pas d'amplification PCR.. à quel moment on en aurait besoin puisque notre gène d'intérêt est déjà amplifié.  [...]

[Immunologie] Diagnostic_PCR

PCR est l'abréviation de l'expression anglaise Polymerase Chain Reaction ou Réaction en Chaîne par Polymérase (le terme français équivalent, Amplification en Chaîne par Polymérisation ou ACP, est rarement utilisé).  [...] Cette technique est également utilisé pour amplifier un segment précis d'ADN d'une bactérie(ou parasite,…) pour étudié le degré de virulence par exemple.   [...]

Pcr

Des concentrations élevées en ADN polymérase peuvent causer l'amplification de produits non spécifiques ou l'échec total de la réaction.  [...]

[Biochimie] Problème en biochimie, 2ème année licence

5'-AAACTACAATTCCCAGCATGCTCCGCGCCC CTTCGTAAATTGCCATTCTAA-3', qui est utilisé dans une réaction d'amplification par PCR, le couple d'amorces que j'utiliserais pour amplifié sera bien AAACTACAATTCCCA et TTAGAATGGCAATTT.  [...] 3ème. Lors de la réaction de polyadénylation, le pre-ARNm est clivé en amont ou en aval du signal de polyadénylation J'aurais dit en amont.  [...]

[Immunologie] Lymphocyte et VIH ...

C'est ce que je comprends aussi. Ce que j'ai voulu dire c'est que ça me paraît un peu abrupte de sauter d'une description mécanistique et structurale d'une particule virale à une explication sur les effets sur l'organisme, sans passer par l'étape interactions du virus avec le système immunitaire pour y venir après J'espère être claire.  [...] Quant à l'inversion I, II je comprend votre lecture mais j'ai du mal à intégrer le rapport au VIH après avoir traité seul l'action les lymphocytes (ou alors juste comment ce virus perturbe leur action ). Mon point de vue était d'exposer l'exemple du VIH comme attache pour décrire les réactions immunitaires.  [...]

Polymérases infidèles....

J'imagine que ca doit permettre de faire des cycles d'amplification en faisant des erreurs, ce qui permet d'effectuer des mutageneses aleatoires du fragment d'interet.  [...] Un autre exemple. la fumée de clope. Les composés de cette fumée sont souvent aromatiques et se fixe sur l'ADN par interaction hydrophobe, on appelle ça des adduits. Ca fait une sorte de protusion sur l'ADN et la polymérase de base va là aussi bugger. Donc il y a intervention d'une polymérase mutagène, la polymérase kappa il me semble, qui va passer ce dommage au prix de mutation.  [...]

[Biologie Moléculaire] le séquençage??? une petite question

Par exemple, si le milieu réactionnel contient une faible proportion de didésoxyribonucléotide à Guanine (ddGTP), on obtiendra à la fin des réactions un ensemble de brins d'ADN de tailles variés, selon l'endroit où un ddGTP se sera inséré et que la réaction aura ainsi été stoppée (ce qui correpond, du fait de la complémentarité des bases, à la présence d'une Cytosine dans le brin d'ADN séquencé).  [...] Tu pars d'un produit d'amplification par PCR du fragment que tu veux séquençer et tu ajoutes une amorce (dans le bon sens STP) pour demarrer la reaction.  [...]