• Forum - Intérêt, Protéine, Question

[Immunologie] Immuno-précipitation/liaison protéineA-Fc

Juste une petite question, Après une IP à l'aide de billes de sepharose couplées à la protéine A, comment déstabiliser les liaisons protéine A-Fc des Ig sans abimer ma protéine d'intérêt.  [...] Plusieurs solutions mais après il faudra optimiser. augmentation de la force ionique (tu incubes par exemple ton complexe dans un tampon assez concentré en NaCl, entre 100 et 500 mM, après il faut optimiser), ajout d'un détergent (triton, CHAPS (assez doux donc risque de ne pas marcher), surtout pas de SDS bien sûr), probablement d'autres solutions sont envisageables.   [...]

[Biologie Moléculaire] Mutations et Southern Blot

Question 1. on fait un southern. cette méthode est elle adaptée pour tous les types de mutation Quelle serai l'expérience la plus adaptée.  [...] Question 1. Connais-tu la technique Southern Que faut-il pour qu'elle fonctionne que permet t'elle d'identifier Essaie de formuler ce qui te pose problème, c'est comme cela que l'on (= toi et nous) trouve les réponses.  [...]

Origine de l'origine

J'ai une question a propos de la synthèse des protéine qui me tarraude depuis quelque temps et qui est peut etre sans interet apparent, mais je n'arrive pas à y répondre. VOila. On sait que L'ARN-polymérase est une enzyme (donc une protéine) essentielle a la réplication de l'ADN pour donner 1 ARNm ( c'est très shématique).  [...] Une réponse à ce genre de question se trouve dans la notion d'échafaudage. Pour construire quelque chose, tu peux construire un échafaudage d'abord, puis ce qui t'intéresse, puis te débarrasser de l'échafaudage. Une voûte par exemple tient par elle-même, mais demande un échafaudage tant qu'elle n'est pas finie.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protocole expérimental

Vous avez donc trois extraits qui constituent chacun un compartiment de distribution des protéines. Votre question est, dans quel compartiment se trouve ma protéine d'intérêt Pour cela vous faites un western.  [...] Perdu parce que les détergents vont vous embêter ensuite. Sauf si vous voulez les protéines membranaires c'est inutile. Il y a une méthode plus simple, que l'on voit en première année de biologie. Un truc tout bête qui fait exploser les cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] phosphorylation et congélation

je vous ai déjà envoyé qqs messages concernant la mise en évidence d'une phosphorylation sur une protéine d'intéret. J'ai pour vous une nouvelle petite question. pensez vous que la phosphorylation soit sensible à la congélation des échantillons. en d'autres termes, puis-je tester un traitement phosphatase après avoir immunoprécipité ma protéine à partir d un échantillon congelé à -80°C (et ayant donc subit un cycle de congélation/décongélation).  [...] Normalement pour l'étude que tu fais, un seul cycle de congélation/décongélation n'affectera pas ton expérience. Le paramètre qui est le plus affecté est la structure de la protéine, donc c'est surtout l'immunoprécipitation qui est concernée (dans le cas où l'anticorps reconnait un épitope conformationnel).  [...]

[Biologie Moléculaire] Approche proteomique

je ne suis pas sûre de comprendre l'objet de ta question. Une approche de protéomique sert à visualiser l'ensemble du protéome, pour cela on sépare effectivement l'ensemble des protéines par éléctrophorèse bidimensionnelle afin d'identifier des spots correspondant normalement chacun à une protéine.  [...] ..). je ne sais pas si c'est très clair. Je ne suis pas sûre de voir l'interêt de faire de la protéomique sur une protéine purifiée mais peut-être ai-je mal compris la question.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

Le problème c'est que ma proteine d'interet est produite uniquement lorsque ma bactérie pousse sur gélose. Je suppose donc avoir des transcrit uniquement dans cette situation. Je me suis penché un peu sur la question et je me demandais si c'est pas trop casse-gueule de récupérer mes cellules sur la gélose.  [...] Par contre, je suis egalement en train de me prendre la tete pour purifier une proteine qui ne s'exprime qu'en solide et pas du tout en liquide. C'est trop te demander sur quoi tu bosses, et si tu as une idee de pourquoi elle ne s'exprime pas en liquide On peut en discuter ici ou en MP.  [...]

[Biochimie] Induction d'une protéine

Enfin une dernière question, après avoir atteint la DO d'indction et avoir ajouté de l'IPTG a ma culture ( une culture avec IPTG et une culture sans pour la comparaison) j'obtiens des valeurs de DO quasi similaire à chaques temps pour les deux cultures, voir meme un peu inferieur en présence d'IPTG, je m'attendais au contraire étant donné que l'IPTG est sencé induire ma protéine d'intéret. J'aurais pu induire ma protéine autrement.  [...] Et enfin si j'ai bien compris, c'est normal que mes DO avec IPTG ne soient pas superieur aux DO sans IPTG, car la quantité de bactérie dans ma solution n'est pas liée à la surproduction de protéine engendrée par l'IPTG, dans ce cas je ne vois pas l'intérêt de faire une étude comparative.  [...]

[Biologie Moléculaire] rrnB plasmide pMALc2x

Petite question de biologie moléculaire, j'ai ajouté mon gène d'intérêt dans le vecteur pMALc2x afin de produire ma protéine avec le tag MBP. Le promoteur est le promoteur tac inducible par IPTG pas de problème, mais à quoi correspondent les régions rrnB ce serait des terminateurs, mais pourquoi je ne les ai jamais vu sur les autres vecteurs d'expression type pET par exemple et surtout qu'est ce que cela apporte de plus, pourquoi avoir choisit un terminateur qui se compose de 2 régions.  [...]

[évolution] mutations génétiques et évolution

Or, il y a un million de façons de s'amuser à définir des populations différentes chez l'espèce humaine (et il n'y en pas une plus interéssante que l'autre. toutes sont arbitraires). je ne vois pas donc pas franchement l'intérêt.  [...] Ils font la structure cristallo et là ils voient que tel domaine est aussi retrouvé chez telle famille, et là comme par hasard cette protéine en question est localisée à un endroit proche de notre protéine d'intérêt dans la cellule. Ce qui prouve une certaine souplesse génétique pour pouvoir créer de nouveaux gènes par mutation et duplication.  [...]