• Forum - Intérêt, Plasmide, Promoteurs

plasmide pcDNA3 et mock??

Le plasmide pcDNA3 est ce qu'on appelle un plasmide vide, c'est à dire qu'il contient tout les éléments d'un plasmide classique (promoteurs, gène de résistance, origine de réplication...) mais pas de gène d'intérêt. Il est utilisé comme témoin négatif lors de transfections (transfection de matériel génétique mais pas d'expression de gène) ou comme témoin positif lors de transformations bactériennes (formation de colonies grâce au gène de résistance).  [...] En fait dans ce cas, les controles de la manip sont les suivants. rien, milieu de transfection, milieu de transfection et plasmide vide. Ils permettent de voir si l'ajout de chacun des composant a un effet sur les cellules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

En fait j'ai un petit soucis, je ne comprend pas le rôle indispensable d'un promoteur pour un gène, en particulier lorsque l'on insere un gene d'interet dans un plasmide vecteur.  [...] Lorsqu'on veut exprimer un gène d'intérêt via un plasmide on utilise des promoteurs dit fort qui on un potentiel transcriptionnel important pour que le gène soit fortement exprimé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Essais luciferase promoteur miRNA

Si quelqu'un a deja fait un essai luciferase sur des promoteurs miRNA, je suis interesse pour savoir la quantite de plasmide utilise (par rapport aux autres plasmide transfectes).  [...] 3. Ne sont pas autorisés les pseudos qui contiennent une adresse mail, messagerie instantanée ou web. Il vous est fortement déconseillé également d'utiliser ce que vous employez par ailleurs comme identifiant de sécurité (par exemple identifiant servant à vous connecter à votre FAI, à votre banque.   [...]

[Biotechnologie] Induction vs. expression

Si j'ai une souche ne portant pas de système d'expression dépendant de l'induction à l'IPTG, c'est mal barré Puis, faut aussi voir que dans la souche d'expression en question l'IPTG doit induire préférentiellement le promoteur dont est dépendant le gène d'intérêt.  [...] Donc, si je comprends, tu as un plasmide recombiné provenant de pET. Le mieux ce serait que tu regardes les différentes cartes de plasmides et que tu dessines une carte de ton plasmide recombiné avec les promoteurs et que tu schématises les différentes interactions dans ta bactos d'expression.  [...]

[Génétique] Comment identifier les promoteurs contenant une sequence consensus d'intéret

Comment identifier les promoteurs contenant une sequence consensus d'intéret.  [...] Je connais la séquence consensus d'un facteur de transcription. J'aimerai identifier dans le génome humain l'ensemble des promoteurs qui possédent cette séquence.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

ceci dit, le plasmide est censé avoir des promoteurs eucaryotes si je comprends bien... Quels sont les différences apportant des avantages et des inconvénients à ces deux systèmes.  [...] Oui mais pour utiliser un plasmide dans une cellule de mammifères, faut il alors qu'il y a ait une origine de réplication de type virale ainsi qu'un promoteur type viral.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs d'expression

Je voudrais savoir quel est l'intérêt de cloner des fragments d'ADN dans une orientation inverse de celle des promoteurs présents ou dans la même orientation Je ne sais pas si c'est très clair.  [...] , et qui, une fois cloné dans le même sens que le promoteur permet la synthèse d'une protéine X).  [...]

Questions sur les éléments d'un vecteur de clonage

Je me doute bien que ces gène sont nécessairement transcrits également. Mais comment Je reste bloquer sur la présence de ce codon stop en aval du gène d'intérêt inséré et de la présence d'un unique promoteur.  [...] L'expression des différents gènes contenus dans un tel plasmide est indépendante. Même s'il y a en effet un codon stop après le MCS, il y a des promoteurs indépendants pour chacun des autres gènes comme celui de résistance. Du coup je pense que cela répond a toutes tes questions, sinon tu peux toujours continuer la discussion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Je me demandais pourquoi, lors d'une transcription in-vitro, on doit obligatoirement linéariser le vecteur contenant l'ADN d'intérêt. Par exemple j'ai cloné mon ADN dans le vecteur pSFV1 pour le transcrire in-vitro je dois linéariser le vecteur à l'aide de l'enzyme Spe1 dont le site est situé juste avant le promoteur SP6 nécessaire à la transcription.  [...] Normalement on linéarise un plasmide pour pouvoir mettre un terme à la transcription in vitro. Si on ne linéarise pas, la polymérase transcrit et ne s'arrête pas. Je trouve ça étonnant de linéariser pour aider la polymérase à transcrire. Un vecteur de clonage est constitué de deux promoteurs, un qui sera en amont de notre gène (ADNc) et l'autre en aval.  [...]

[Biologie Cellulaire] Plasmide eucaryote/bactérien dans une lignée cellulaire

Tous les promoteurs eucaryotes ne sont pas identiques certains fonctionne chez d'autres espèces (en général ce sont des gènes issus d'organismes pathogènes) mais selon mon expérience la plupart du temps ça ne marche pas. C'est pourquoi on utilise des plasmide dit d'expression qui ont un promoteur et un terminateur plus ou moins fort en fonction de ce que tu veux faire voir même inductible, provenant en général de l'organisme hôte.  [...] Sinon c'est un gène humain, je sais que le promoteur naturel est assez fort mais quand je transforme une lignée cellulaire avec un plasmide bactérien (donc sans origine de réplication eucaryote) contenant ce gène je n'observe aucune expression. Je cherche donc a savoir si le problème vient du vecteur bactérien ou non avant de me lancer dans le clonage du gène dans un vecteur eucaryote.  [...]