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mode action enzymes de restriction dans une cellule

mode action enzymes de restriction dans une cellule.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] - Traitement du plasmide receveur avec les enzymes de restrictions, puis traitement à la phosphatase alcaline (aussi cela évitera que le plasmide se recircularise quand vous rajouterez la ligase et l'ATP.) et purification.  [...]

[Biotechnologie] Enzyme de restriction

3.j aurai besoin du mode d action exact des enzymes de restriction de type deux.  [...] Euh... Ce n'est pas ça un palindrome. Par ailleurs, si c'est invariant, comment ça peut subir des changements Là c'est juste une question de logique que je trouve illogique.   [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

oui, mais s'il se débarasse du plasmide ils auraient du utiliser des enzymes de restrictionalors que la dans l'article il ne l'utilise pas.  [...] Grace a la PCR ils n'ont pas besoin d'enzyme de restriction pour sortir le gene d'interet du plasmide donneur. La seule etape ou elles sont necessaires c'est pour ouvrir le vecteur receveur.  [...]

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

L'avantage de ces enzymes est qu'ils coupent des séquences en acide aminés très spécifiques et forment (souvent) ce qu'on appelle des bouts collants (ils ne coupent pas les doubles-brins nets mais laisse dépasser un des deux brins). L'intérêt de ceci est qu'un bout collant généré par une enzyme de restriction aura tendance à s'attacher à un bout collant généré par la même enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Bah en faite c'était des réponses de mes souvenirs de 3 ans. Les réponses que j'ai apporté ne sont pas d'une grande aide. En tapant enzyme de restriction sur google on trouve la même chose. De toute façon ce qui lui reste à faire c'est de lire à fond le cours, les questions sont la base de ça.  [...] Chaque outil de découpe représente une enzyme de restriction différente et chaque endroit où la coupure est plus facile devrait représenter le site de restriction spécifique à l'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Est-ce que vous rajoutez bien la BSA qui est nécessaire pour un clivage optimal par Sfi1 Quel contrôles intra-manip avec vous fait (contrôle de clivage par l'enzyme, de recircularisation du vecteur,...) Quelles bactéries utilisez-vous pour la transformation Avez-vous fait le contrôle de base nécessaire sur la transformation des bactéries. transformation avec un plasmide contrôle.  [...] La vérification du clivage des ADNc par une enzyme de restriction peut se faire si le clivage génère des fragments de taille différente et suffisamment longs. Ainsi par migration sur gel d'agarose, la présence des bandes d'intérêt permet de valider le clivage.  [...]

[Biologie végétale] Compréhension d'un article sur les OGMs

Pour moi, pour générer un OGM, on devait ajouter ou utiliser des sites de restrictions déjà présent et cliver ces derniers par une enzyme de restriction (ER) d'une part dans le gène d'intérêt que l'on veut ajouter dans l'OGM et d'autre part dans le plasmide ou vecteur qui transportera ce gène d'intérêt.  [...] Et donc, une fois obtenu notre gène d'intérêt en surproduction et purifié, c'est celui là qu'on est censé reprendre en 2.4 pour la suite de l'analyse, sinon le 2.2 aurait été inutile Ensuite on reprend donc la séquence qu'on amplifie de nouveau en PCR pour y introduire de nouveaux sites de restriction et recréer un vecteur qui sera cette fois inséré dans le tabac par la technique leaf disk (si j'ai bien compris).  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

Si on utilise la même enzyme de restriction pour le vecteur et l'insert, on aura le site de restriction du vecteur qui va correspondre aux extrèmités débordantes de l'insert, donc celui-ci pourra s'hybrider facilement avec le vecteur.  [...] Mes professeurs appelaient ça digestion ménagée. Je crois qu'on utilise un chélateur d'ions divalents pour limiter l'action des enzymes de restriction ( EDTA dans le cas des endonucléases, qui va chélater le Mg2+ dont ces enzymes ont besoin pour fonctionner).  [...]

Position des bases

En fait lorsqu'on nous dit par exemple on a un site de restriction BamHI = G/GATCC en position, cela veut-il dire que pour le G/G, le deuxième G est en position 1 ou le premier G.  [...] GGATCC est appelé site de restriction. On peut numéroter les positions, même si cela a assez peu d'intérêt (ici de 1 à 6). le trait vertical de césure correspond au site de coupure de l'enzyme (BamHI coupe entre le premier et le second G).  [...]