• Forum - Intérêt, Contrôle interne, Méthode

[Biologie Moléculaire] analyse des résultats d'une QPCR

Dans mon expérience, j'ai des CT values pour mon gène d'intérêt. j'ai également de CT values pour un gène servant au contrôle interne. J'ai une courbe standard pour ces deux gènes afin de déterminer le meilleur treshold. Je ne prends pas les valeurs correspondant aux réactions -RT dans mes calculs vu qu'elles sont nulles.  [...] Etant donné que j'ai des courbes standard, j'ai pu quantifier de manière relative mon cDNA d'intérêt et le cDNA contrôle. Est-ce que je peux diviser la quantification relative de mon cDNA d'intérêt par celle du cDNA contrôle pour avoir une quantification normalisée grâce au contrôle interne Ou est-ce que je suis obligée de passer par la méthode delta delta CT.  [...]

[Microbiologie] Problèmatique méthode PCR

Je suis étudiant en 2éme année de BTS Bio-analyse et contrôle, et je réalise actuellement mon Stage dans le laboratoire interne d'une entreprise agro-alimentaire, dans celui-ci s'y trouve une nouvelle méthode de PCR pour la détection (et la quantification ) de Listeria mono, le but est donc de trouver à cette méthode une problématique pour me donner de quoi réflechir pour former quelque chose.  [...] Auriez-vous des idées. Peut'on éventuellement étudier sur le cycle threshold et quantifier à partir de celui-ci le nombre de bactérie contenue dans l'inoculum de départ.   [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

...Dans le cas où les deux protéines ont des poids moléculaires suffisamment espacés, on peut couper la membrane entre les deux tailles attendues (grâce au marqueur de taille) et faire l'incubation de chacune des parties avec l'anticorps adéquat. Ou alors, si les deux protéines ont des tailles proches, il y a trop de risque de couper des bandes d'intérêt, donc on peut faire migrer deux gels en parallèle.  [...] Ce que je fais maintenant c'est un mix de mes 2 Ac primaire. Comme ca, les conditions sont scrupuleusements identiques entre mon controle et ma proteine d'interet. Si les tailles sont trop proches... changer de controle interne.  [...]

[Biologie Moléculaire] contrôle interne en RTqPCR

Je dois rendre un rapport concernant une étude portant sur la détection du virus de la FCO (en médecine vétérinaire). Pour cela, on utilise deux RT-q-PCR en parallèle, chacune spécifique d'un segment d'ARN (le virus est un virus à ARN). Mais on utilise également une RTqPCR pour la détection de la béta actine en tant que contrôle interne, et ceci dans des échantillons négatifs ou positifs pour le virus.  [...] cela peut aussi servir a normaliser une concentration d'intérêt si l'on part du principe que le contrôle interne a une expression constante.  [...]

Contrôle interne : diagnostic de légionellose

moi je vais travailler sur la mise au point d'une technique de PCR temps reel pour le diagnostic de legionella pneumophila certes je ne sais pas oi utilise comme controle interne.  [...] Puisque d'apres la literature le controle interne correspond a un ADN synthetique de sequence identique a la cible a l'exception d'une partie.. j.  [...]

real time pcr

est ce que ca pose un probleme si mon gene de controle interne est beaucoup plus exprimé que mon gene d' interet ( ADNr par rapport a un poly A).  [...] Il faudra donc que je dilue la solution dans laquelle je veux mesurer le controle par rapport a celle du gene d interet. ca ne pose pas de probleme.  [...]

[Biochimie] contrôle interne pcr

Dans la colonne du contrôle positif, j'ai deux bandes. celle du contrôle interne (157 bp) et celle du contrôle positif(284 bp ). C'est là que je comprends pas bien, est ce que le gène (inv A) des salmonnelles a la même taille que la séquence de l'adn du contrôle positif reconnue par les primers.  [...] Le contrôle interne correspond en général à de l'ADN que l'on ajoute au mix PCR afin de vérifier que la PCR a bien fonctionné même quand le résultat est négatif.  [...]

[Biologie Moléculaire] Beta actine : contrôle interne en PCR

je travaille actuellement à la mise en place d'un contrôle interne endogène dans une PCR. Je vois que beaucoup utilise la beta actine qui est présente dans toutes les cellules.  [...] J'ai vu qu'ils venaient de sortir une plaque spéciale contrôles endogènes avec des essais TaqMan préchargés pour 32 gènes différents. C'est peut-être un bon moyen d'identifier le meilleur contrôle pour vos études. Voici le lien. https.//products.appliedbiosystems.c...2&catID=605458.  [...]

différence entre western blot et immunoblot

L'intérêt de les séparer est de pouvoir identifier un ou des isoformes. Et permet également de vérifier la taille de sa protéine, lorsque l'on rajoute un marqueur de taille.  [...] ok je vois, à propos des contrôle interne quand est ce qu'on utilise la GAPDH, la tubuline ou l'actine Ou on peut utilisé celle qu'on veut.  [...]

[Génétique] Proposition d'expériences pour travaux futurs

La quantification de relA faite par les auteurs ne prouve en faite pas grand chose car le contrôle interne, hrdB, n'en n'est pas un car représente un gène de ménage ou promoter stringent donc forcément une cible de l'alarmone ppGpp, ce qui fait diminuer l'expression d' hrb après un stress.  [...] Le probleme c'est que c'est totalement hors du champ d'expertise. La strategie qPCR etait bonne, le facteur sigma majeur est un parfait controle interne puisque que son expression varie tres peu. Le seul probleme, c'est que dans precisement ce cas la, c'est le premier a varier, et le pire controle.  [...]