• Forum - Intérêt, ADN, Bactérie, Enzyme

[Microbiologie] enzyme de restriction I-Ceu I !!!!

Bon j'ai pas bien compris votre réponse. il est probable qu'il soit absent de nombreux génomes ce qui permet de l'insérer artificiellement ou on veut -. tu veux dire quoi par il l'enzyme ou l'ADN.  [...] ils m'ont demandé de savoir pourquoi cet enzyme a été prècisèment choisi pour couper l'ADN de ma bactérie,quel interet de couper l'ADN de cette bacterie avec ICeuI et non par une autre enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] les enzymes

La PCR necessite des temperatures élevées pour séparer les deux brins d'ADN. Tu peux donc deviner l'interet d'une telle enzyme.  [...] Cette enzyme, une ADN-polymérase d'origine bactérienne a en effet permis l'élaboration d'une technique révolutionnaire d'amplification de l'ADN. La PCR(réaction de polymérisation en chaîne.).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Après votre PCR, procédez à une digestion enzymatique de vos produits par l'enzyme de restriction DpnI. L'intérêt est que cette enzyme coupe un site de 4pb (donc très fréquent) uniquement quand celui ci est methylé. Du coup vous coupez le plasmide qui a été méthylé lors de sa production en bactérie mais pas vos produits PCR.  [...] Dans la mesure où tu connais la séquence de ce que tu amplifies, tu peux même choisir l'enzyme pour être sûr qu'il y a un site (ou mieux, plusieurs) dans ta séquence cible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Adn complementaire

L'ADNc est synthétisé à partir de l'ARN messager du gène d'interêt, en réalisant généralement une transcription inverse (ARN vers ADN) à l'aide d'une enzyme virale (du même genre que celles des rétro-virus). L'ADNc est donc similaire à l'ADN messager après épissage, donc sans introns.  [...] Il sera donc plus court que le gène d'origine si celui-ci possède des sites d'épissage. Vu que c'est un ADN synthétisé par PCR, c'est donc un ADN double brin linéaire.  [...]

[Microbiologie] Produit d'intérêt industriel

Voila, j'ai besoin de trouver un métabolite secondaire ou une enzyme à intérêt industriel. agroalimentaire, pharmaceutique, de biocontrole…..secrété à partir d'une bactérie qui, elle aussi est intéressante, pour avoir sa biomasse en même temps.  [...] Moi je travaille sur des polyketides de Mycobacterium tuberculosis mais dans ce cas la ils n'ont pas d'interets industriels. Ils sont impliqués dans la virulence et la pathogénie de la bactérie... Ils ont un interet médical car certaines polyketides synthases sont essentielles à la survie de la bactérie.  [...]

phage M13 et transformation bactérienne

Si j'ai bien compris le phage M13 est un phage possédant un ADN simple brin qui infecte les bactéries possédant uniquement le pilus F dans lesquelles il duplique son génome sous forme RF puis au bout de plusieurs cycles de réplication on aura uniquement synthèse asymétrique du brin initial sans lyse des bactéries.  [...] dans ce cas est ce que le phage M13 possède lui aussi un opéron lactose par exemple codant uniquement pour le peptide alpha qui serait complémentaire de la partie de la beta galactosidase synthétisée par la bactérie et dans le cas où notre ADN d'intérêt aurait été inséré on aurai plus de synthèse de la beta galactosidase.  [...]

Intégration dans un plasmide

L'intégration de séquence d'intéret ( un ou plusieurs gènes ) se fait par technique d'ADN recombinant. En gros, tu vas utiliser des endonucléases ( ou enzymes de restriction) qui font créer des extrémitées cohésives ( pouvant être ligasé par une ADN ligase ) sur ta séquence d'intérêt et sur ton vecteur plasmidique.  [...] J'imagine qu'un ADN linéaire serait dégradé puisque ce n'est pas sa forme normale dans une bactérie (de même qu'un ADN linéaire sans télomères dans une cellule eucaryote).  [...]

[Biologie Cellulaire] Manip de co-IP??? what's wrong!!!

ce qui me contrarie c'est que je révèle cette enzyme aussi bien des culots d'IP d'intérêt que dans le contrôle négatif. J'ai refait la manip au moins 5 fois et c'est tj le même résultat. D'après vous, comment vous expliquez cela... sachant que mon lysat cellulaire totale est toujours traité par la benzonase (pour dégrader l'ADN).  [...] j'immunoprécipite et là je révèle la topo2 dans tous les culots d'IP même dans les cellules non transfectées V5 (je rappelle que l'Ac immunopricipitant et l'anti V5 qui tague ma protéine d'interêt). je suis resté bouche B, et je suis rentré chez moi pour dormir.  [...]

Dosage biochimique de l'activité enzymatique de bactèries

pour mon projet de fin d'études je dois doser les activités enzymatiques d'un certain nombre de bactèries pour établir ensuite une classification en fonction de ce dosage. mais je ne trouve pas les protocoles expérimentaux avec lesquels je vais travailler. Merci de votre aide.  [...] Pour extraire les enzymes des bacterie ilfaut commencer par les lysée puis chercher a recuperer specifiquement les enzymes d'interet (extraction + purif) ou bien tester carement le jus apres lyse des cellules.  [...]

[Biotechnologie] Fragilisation d'une paroi de champignon

j'essaie d'extraire l'ADN des spores de ma petite bete mais rien y fait donc s'il y a des gens qui pourrait me donner des pistes plutot enzymatiques pour fragiliser voir détruire la paroi d'une spore de champignons je suis préneuse.  [...] en effet ça serais plus simple mais cette souche est difficile à faire germer il faut environ 2 à 3 mois pour qu'elle germe d'où l'intéret de pouvoir récuperer son ADN avant qu'elle germe. Je sais bien que le risque de dégradation de l'ADN est important en utilisant des enzymes mais je pense que c'est une bonne solution.  [...]