• Forum - Intérêt, Activité, Rapporteur, Niveau, Expression

Stratégies d'insertion de fusions de gènes

2. Inconvénient. on ne sait pas où la contruction s'intègre, elle peut donc être insérée au coeur d'une séquence essentielle à la régulation du gène d'intérêt et donc l'activité du gène rapporteur peut ne plus refléter strictement le niveau d'expression du gène d'intérêt.  [...] Moi, ici, je suis plutôt dans une démarche de fusion de gènes (fusion traductionnelle) ou d'opérons (fusions transcriptionnelle) entre gène d'intérêt et gène rapporteur, de façon à étudier le type de régulations transcriptionnelles et post-transcriptionnelles qui contrôlent son niveau d'expression, ce dans différentes conditions (ex.  [...]

[Biologie Moléculaire] organisation plasmide

Dans un plasmide expression( rapporteur). il y a un gene de résistance pour le sélectionner, une origine de réplication, un MCS et par exemple le gène lacZ juste apres.  [...] Non il ne faut pas aller chercher trop loin. Si c'est un plasmide RAPPORTEUR, on veut mesurer l'ACTIVITE d'un PROMOTEUR en mesurant indirectement l'expression d'un gène quantifiable comme ß-galactosidase. Dans ce cas la, on a besoin DU PROMOTEUR d'intérêt et c'est lui que l'on clone dans le MCS en AMONT du gène rapporteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] Système Gal4 UAS

alors c'est la première fois que j'écris sur ce forum et vu qu'apparemment y'a souvent des réponses pertinentes je voulais savoir si quelqu'un pourrait m'expliquer svp le principe du système GAL4 UAS chez la drosophile (on a utilisé ce système dans un cours qui parle de vieillissement et ils ont voulu tester l'importance de l'enzyme SOD), je voudrai donc savoir quel était l'intérêt de ce système et comment ça fonctionne et autre chose que veut dire ACTC5 que je trouve constamment a chaque fois qu'ils utilisent le système GAL4 UAS.  [...] en gros, cela permet d'exprimer un gène rapporteur (dont on peut visualiser/quantifier/suivre l'expression. une protéine fluorescente, par exemple) quand le gène d'intérêt s'exprime. On peut donc savoir où et quand il s'exprime.  [...]

[Biochimie] Empreinte à la DNase+ TAMOXIFENE

Pour cela, le gène exprimant la CRE comporte également un site de liaison au tamoxifène. Ainsi, de faibles doses de tamoxifène vont induire l'expression de l'activité recombinase de la CRE.  [...] Pour détecter une séquence enhancer ou silencer d'un gène d'intérêt, il faut démontrer que la délétion ou la mutation de la séquence entraîne une modification de l'expression du gène régulé (ou du rapporteur ayant pris la place du gène).  [...]

[Biologie végétale] Différence entre GUS et RT-PCR

Dans le cas du gène rapporteur GUS, tu as localisation de l'expression à un endroit précis in situ. Autrement dit, je souhaite savoir où et quand s'exprime le gène tartampion, je fais donc une construction fusion entre le gène GUS et le promoteur du gène d'intérêt et je suis l'apparition de la coloration bleue.  [...] Ce qui est important là c'est que le gène GUS code comme tu l'as précisé pour une enzyme donc je pourrai suivre l'évolution de l'activité enzymatique au cours du temps. cela me donnera une cinétique via laquelle je pourrai déterminer la cinétique d'expression du gène d'intérêt.  [...]

[Biochimie] principe du gene rapporteur, sonde

La quantité d'oxyluciférine produite est proportionnelle à l'activité de la luciférase donc à l'activité du promoteur du gène rapporteur ainsi que du gène dont l'on cherche à mesurer l'expression.  [...] Je pense que dans ce cas la sonde bioluminescente est l'oxyluciférine + émission de photons. Cette sonde s'accumule au site d'expression du gène rapporteur.  [...]

Gène de ménage (gène de référence...)

Lorsque tu auras compris le Ct tu verras que le delta Ct est logique. C'est la différence entre le Ct du gène que tu veux analyser et le Ct du gène rapporteur ou gène de ménage. Ainsi tu peux avoir une valeur relative d'expression de ton gène d'intérêt. En fait ton gène de ménage sert à normaliser tes valeurs pour pouvoir comparer différents échantillons.  [...] Ensuite, tu peux comparer ton Delta CT entre plusieurs tissus différents (ou bien plusieurs conditions...) et ainsi mettre en évidence des variations dans l'expression de ton gène d'intérêt, toujours par rapport au gène de référence, qui théoriquement ne doit pas bouger.  [...]

[Génétique] Enhancer trap

un enhancer va permettre l'expression de GAL4 qui va induire l'expression du gène rapporteur via UAS... mais je vois pas l'intérêt de faire ça c'est horrible... on peut en conclure quoi.  [...] Mais je ne vois pas l'utilité d'insérer un facteur de transcription dans une souche.. et un gène rapporteur dans une autre.. à part pour voir que quand on les croise il y aura expression du gène rapporteur.. je ne vois pas la finalité le but et donc Y a t il une suite.  [...]

[Biologie Moléculaire] "Apparition" d'une séquence de fin d'épissage

En fait, il s'agit de nous faire étudier la régulation de l'expression d'un gène en réalisant plusieurs constructions de type séquence non codantes du gène d'intérêt+gène rapporteur sans ses UTR, et en faisant varier les zones déletées d'une construction à l'autre.  [...] En effet je risque d'avoir un ARNm de type. Exon / morceau d'intron / gène rapporteur... Et on peut très bien imaginer que mon morceau d'intron fausse la lecture du ribosome (détachement du ribosome, création d'un codon start prématuré,...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Dégradation de la cycline D1

La progression des cellules eucaryotes à travers le cycle cellulaire dépend de l,activité d'une série de complexes composés des cyclines et des kinases dépendantes des cyclines. La cycline D1 subit une protéolyse dépendante de l'ubiquitine, importante pour conserver son niveau d'expression.  [...] Si la cycline D interagit avec une ubiquitine ligase, cette interaction rapproche le domaine de liaison à l'ADN de GAL4 avec son domaine de transactivation et cela active l'expression du gène rapporteur qu'on peut visualiser (levures bleues si le gène rapporteur code la beta-galactosidase).  [...]