• Forum - Intensité, Quantité, ADN

[Biologie Cellulaire] Résultat typique de FACS pour étudier le cycle cellulaire avec l’iodure de propidium

Je sais que l'axe des abscisses correspond à l'intensité de la fluorescence en Ua et l'axe des ordonnés le nombre de cellules.  [...] De plus, pour moi l'intensité de fluorescence n'est pas proportionnelle à la quantité d'ADN. Sinon, pourquoi expliquer un pic si énorme en G0 ou G1, et non après la phase S, en G2/M où la quantité d'ADN est doublée.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

Dans ton cas, je ne dirai pas que c'est le stress qui est entièrement responsable du résultat. Il y a beaucoup de paramètres qui peuvent expliquer ces différences de quantité après PCR (qualité des explants choisis pour l'extraction, qualité de l'extraction, PCR et réactifs capricieux, emplacement dans le thermocycleur...).  [...] NB (et à garder en tête). quand on fait une PCR classique, l'intensité des bandes reflètent en général la quantité d'ADN amplifié mais ce n'est pas strictement vrai et il ne faut pas conclure qu'on a plus ou moins d'ADN.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

La spécificité se fait sur 2 éléments, la complémentarité des amorces sur la séquence d'ADN, donc on aligne quelques centaines de séquences de différentes espèces pouvant être dans notre milieu et on choisit deux sites spécifiques de notre espèce d'intérêt.  [...] Pour ce que tu nous raconte, il s'agit de PCR quantitatives où grosso modo il y a incorporation d'un element fluo pendant l'élongation (pour un type de qPCR donné) la détection s'effectue grace à un lazer qui va quantifier l'intensité de fluo qui augmente avec la quantité d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

Déjà, il faut comprendre ce qu'on observe. le paramètre mesuré est un signal dont l'intensité dépend de la quantité d'intercalant intercalé dans l'ADN double brin. Ainsi, la différence de signal entre le début et la fin du run correspond à tout ce qui a été amplifié pendant le run.  [...] Ensuite, courbe d'amplification. votre signal décolle a partir d'un certain cycle, jusqu'a atteindre un plateau (pas important). Le moment ou le signal de chaque échantillon décolle, le Ct, est directement lié à la quantité d'ADN initiale. C'est d'ailleurs ce qui permet de le quantifier.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

Ensuite il y a une extrapolation à faire pour déterminer combien il y a d'ADN dans la bande de marqueur à partir de la quantité de marqueur déposée dans le puits.  [...] On peut alors dire combien il y a d'ADN dans la bande du puits 1 ou 3 de même intensité, et sachant quel volume on a déposé dans le puits, on peut alors savoir quelle concentration on avait dans le tube, et donc la quantité d'ADN qu'on avait à la sortie de la PCR.  [...]

PCR en temps réel

en cherchant sur internet le principe de la pcr quantitative taqman, je me rend compte qu'il faut 2 paires d'amorces. 1 pour l'amorçage et 1 taqman. Or moi pendant mon stage, j'ai utilisé que les sondes taqman. j'ai obtenu des bons résultats mais je me demande si ils sont valides du coup et je me pose la question que je m'étais jamais posée.  [...] Dans la méthode Taq man il ya a deux molécules à chaque extrémité de la sonde qui fait en moyenne un dizaine de nucléotides, les deux molécules sont donc trés proches mais pas accolées.. lorsque les deux molécules sont trés proches aucune fluorescence n'est possible car l'une empéche l'autre de fluorescer c'est le phénoméne de quenching cependant lorsque la sonde s'hybride elle est dégradée par la polymérase ( qui polymérise a partir des primers) les deux molécules sont donc libérées l'une de l'autre et il y a donc émission de fluorescence dont l'intensité est proportionelle à la quantité d'ADN.  [...]

biologie moléculaire;etude de fragments

Je vois ce que tu veux dire. En fait c'est une mesure quantitative du nombre d'amplicons je crois. Je suis désolé je m'en souvient plus trop, mais si ton sujet est important pour toi, alors je peux t'envoyer un scan d'un cours qui porte sur ça, et en détail en plus.  [...] Ce que je peux te dire c'est que d'abord on trace une courbe-étalon avec des quantités connues d'ADN en fonction de l'intensité de fluorescence. En principe, on se débrouille pour que le fluorophore émette sa fluorescence que dans l'amplicon et non dans les amorces ou les nucléotides triphosphate. Et après...black hole in my memory, sorry.  [...]

purification d'ADN sur gel

J'ai un problème avec la purification de l'ADN excisé à partir du gel. le volume d'ADN que je récupérè après élution est très faible sachant que j'utilise un it de purification et que le volume du tampon d'élution que j'utilise est choisi en fonction de l'intensité de la bande de départ.  [...] Tout dépend de ce que tu appelles faible. Qu'est-ce que tu dépose (plasmide, PCR...). Quelle quantité originale Quelle application derrière.  [...]

[Biologie Moléculaire] CT variable

je suis en stage en M2, j'ai comme objectif de mesurer la variabilité de l'expression de certains gènes d'intérêt, pour cela j'ai dessiné des amorces qui ciblent ces gènes dans différentes espèces bactérienne. Je suis entrain de faire la validation des amorces j'ai donc fais une gamme étalon avec 5 différentes dilutions de mon échantillon ( facteur de dilution 2), et de différentes concentrations d'amorces dans le mélange réactionnel.   [...] déja l'intensité de fluo varie en fonction de l'étape du cycle, mais si tu prend l'intensité de fluo uniquement à l étape ou les brins sont hybridé, alors tu n'est pas censé avoir de baisse puisque ca reviendrai a dire que tu as perdu de l'ADN si tu as moins d'intensité qu'au cycle precedent (comme on peut le voir pour les cycles 10, 13, 14, 15, 19 sur ton graphe.  [...]

Moustiques résistants

d'après le doc 1, la résistance des moustiques aux insecticides est due à une mutation et/ou à la présence d'une grande quantité d'enzyme nomée estarase, ou encore à la modification de l'acétylcholinestase.  [...] Le moustique 19, quant à lui, possède en grande quantité le géne B4 de l'estérase mais la quantité d'enzyme provenant de ce gène est égale à celle provonant du gène A4 malgré que celui-ci soit possédé en plus faible quantité.  [...]