• Forum - Hybridation, Sondes, Cellules

Tampon phosphate NaCl?

C'est pour des lavages après hybridation de sondes, sur des lames d'étalements de cellules métaphasiques.  [...] Il existe des tables toutes faites (facilement trouvables sur le web. exemple ici http.//microscopy.berkeley.edu/Resou...n/buffers.html ) qui indiquent quel volume de chaque solution ajouter selon la molarité et le pH final. Selon cette table, pour obtenir un pH de 7,8 il faut 8,5 % de NaH2PO4- et 91,5 % de Na2HPO4(2-).   [...]

[Biologie Moléculaire] hybridation in situ

je veux réaliser une hybridation in situ en utilisant des sondes marquées par cy3 et FAM sur des cellules d'amibes, je veux savoir est ce que la température (Tm) intervient dans la réaction d'hybridation.  [...] est ce que je doit réaliser PCR avec ces sondes mais sans marquage avant de réaliser l'hybridation in situ pour obtenir Tm exacte d'hybridation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ARNm

Je dois faire une hybridation in situ d'ARNm ou peut être de miR sur des coupes de tumeurs, mais je m'interroge sur les temps d'hybridation nécessaire étant donné que mes sondes n'auront pas du tout la même taille.  [...] Pour les ARNm j'utiliserai des sondes de 100 à 500 bases et pour les miR des sondes d'environ 20 bases, quelle devrait être l'ordre de grandeurs des temps d'hybridation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dot Blot

Je vous sollicite car je ne comprend pas véritablement le fonctionnement de la méthode Dot Blot utilisée dans le cadre de recherche de mutations ponctuelles connues.   [...] °si on a un juste un spot avec l'hybridation de la sonde normale et aucun avec la mutée, le patient ne portera pas la mutation (il sera homozygote sain).  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et génération des sondes

j'aurai bien besoin de conseils de quelqu'un connaissant l'hybridation in situ. En fait je cherche à montrer la colocalisation de 3 protéines sur des coupes de tissu nerveux. Malheureusement il n'existe un anticorps spécifique que pour une des 3 protéines, je dois donc passer à l'ISH pour les 2 autres.  [...] Si on utilise directement les oligos avec les sites de transcription, on ne risque pas d'empêcher l'hybridation vu que seule la moitié de la séquence sera complémentaire.  [...]

PCR en temps réel

il ya l'autre technique de pcr en temps réel qui me pose problème. en sonde d'hybridation, les sondes ne sont pas hydrolysées par la taq alors que c'est le cas en taqman (enfin si j'ai bien compris) et je me demande pourquoi les sondes d'hybridation émettent de la fluorescence quand elles sont cote à cote, c'est bien ça.  [...] puis il ya la pcr qui utilise 2 sondes appelées d'hybridation l'une porte un fluorochrome donneur et l'autre un fluorochrome accepteur. quand elles sont cote à cote le donneur transmet son énergie d'exitation à l'accepteur qui émet de la fluorescence. et ma question est de savoir si ces 2 sondes sont également hydrolysées par la taq car apparament d'apres ce que j'ai lu ce n'est pas le cas et je comprend pas pourquoi.  [...]

hybridisation in situ et immunomarquage

J'ai cloné un gène impliqué dans le développement du système nerveux central du poulet. Je fais une experience d'hybridisation in situ afin de determiner son _expression spatio-temporelle que je cherche à coupler avec une experience d'immunomarquage. Je ne vois pas trop comment coupler les deux experiences ensemble et surtout comment je fais pour produire mon anticorps.   [...] Sinon, je pense que decoupler les deux manips hybridation in situ et immuno est nettement moins problematique. D'apres ce que j'ai pu entendre (jamais tenter personnellement), la combinaison des deux est au mieux, pas une partie de plaisir, au pire incompatible.  [...]

[Biologie Cellulaire] substrat de la phosphatase alcaline

merci j'ai finalement trouvé le substrat et effectivement il faut être à un ph alcalin pour que le produit de réaction soit ionisé (ce qui lui donne sa couleur jaune). Mais je voudrais savoir si quelqu'un a essayé le traitement d'une labteck avec ce réactif et s'il est possible de voir ainsi l'activité de la phosphatase.   [...] Je n'ai jamais essayé, par contre j'ai fait l'expérience avec les peroxydases endogènes.. J'ai oublié de les bloquer avant mon marquage et elles ont magnifiquement catalysé le substrat. J'utilisais un kit classique de révélation, ce qui te permets d'etre dans les bonnes conditions de pH.   [...]

[Biologie Cellulaire] Hybridation in situ

je dois faire de l'hybridation in situ et je cherche un lien qui m'informe sur les protocoles et sur le nombre de sondes différentes que l'on peut utiliser sur une coupe de cerveau et quel type d'hybridation est préférable (sonde chaude ou froide).  [...] Vous avez oublié une chose essentielle lorsque l'on ouvre une discussion sur le forum. la politesse (voir Charte).   [...]

[Biologie Moléculaire] Différence d'action entre l'ADN-COT1 et l'ADN de sperme de saumon

je fabrique des sondes ADN pour la FISH, dans lesquelles j'ajoute de l'ADN-COT1 et de l'ADN de sperme de saumon. Je sais que l'ADN-COT1 masque les séquence répétées (type ALU) de l'ADN. L'ADN de sperme de saumon semble avoir un rôle équivalent en empêchant une hybridation non spécifique, mais que masque-t-il exactement.  [...] Merci pour cette réponse que j'avais lue sur le forum, mais qui ne m'éclaire par réellement sur l'utilisation que je fais du sperme de saumon. Je ne fais pas de western ou southern blot, je n'utilise donc pas de membrane. Les sondes que je fabrique sont utilisées pour faire de l'hybridation in situ sur des chromosomes en métaphase ou des noyaux en interphase.  [...]