• Forum - Hybridation, ADN, Technique

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

- contaminaton des échantillons (je précise que les cones n'ont pas été changés), mais je ne vois pas en quoi cela expliquerait la faible migration. A moins que dans ce cas là, la présence simultanée de plusieurs enzymes aurait engendré des fragments vraiments minuscules, ce qui expliquerait que ceux ci soit sortis du gel.   [...] Mon ADN lambda à un poids moléculaire de 48 502 pb. Et le premier fragment de mon marqueur correspond à 21 226 pb. Or en regardant mon gel, je constate que mon ADN lambda( puit n°4) à migré au meme niveau que le premier fragment du marqueur. comment peut- on expliquer cela puisqu'ils n'ont pas le même poids moléculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] Je pense d'après ta question qu'il s'agit du Northern Blot que pratiquement plus personne n'utilise aujourd'hui car d'autres techniques moins dangereuses que la radioactivité ont vu le jour. la RT-PCR en temps réel qui elle fait appel à de la fluorescence toute bête.  [...]

Random priming

En cours, notre prof nous a présenté ça comme étant une technique de sélection par hybridation de gènes d'intérêts à partir d'une banque d'ADN (par exemple).  [...] J'ai bien compris le processus permettant d'obtenir des sondes marquées capables de s'hybrider à un ADN donné. Ce que je ne sais pas, c'est comment ces sondes peuvent s'hybrider spécifiquement à une gène d'intéret de séquence inconnue Après réfléxion, j'en viens même à me demander si c'est seulement possible via cette technique (et donc ce qu'on utilises en pratique pour faire ça).  [...]

[Génétique] CGH-array

Ayant subi des prélèvements sanguins (parents + enfant) pour un CGH-array ou hybridation génomique à puce d'ADN, nous voudrions connaître les délais pour obtenir les résultats (approximativement) de cette technique.  [...] Nos prélèvements ont été envoyés au CHU de Nancy mais le généticien ne nous a pas donné approximativement les délais. Ils ont été faits pour un éventuel diagnostic d'une maladie chromosomique entraînant un retard mental.   [...]

[Génétique] Production ARN polymérase et retour dans le noyau

la différence entre l'ADN et l'ARN mis a part la double hélice, est la thymine quui n'est qu'une uracile méthylée ( il me semble) et les ADN et les ARN peuvent quand meme s'hybrider ( cf technique d'hybridation pour la PCR) ainsi il aurait suffit à une cellulle de se tromper entre une thymine et une uracile pour creer un ARN, qui est moins stable que l'adn et ainsi mieux réguler ses voies métaboliques.  [...] Dans le cas du VIH, l'ADN viral, issu de la rétrotranscription de l'ARN du virion, est associé à l'intégrase du virus dans le cytoplasme de la cellule parasitée. C'est en fait cette intégrase qui possède une séquence NLS, et permet l'entrée de l'ensemble du complexe de pré-intégration (ADN + intégrase) dans le noyau.  [...]

[Biologie Moléculaire] détection de gènes multicopies

Tout d'abord j'avais penser faire une digestion de mon adn, puis faire migrer, suivi d'une hybridation avec une sonde radioactive et j'aurais alors pu voir si une ou plusieurs bandes s'allumaient. Malheureusement cette technique nécessite une grande quantité d'adn que je n'ai pas.  [...] Pour le principe de la FISH interphasique et bien déjà on peut la faire sur n'importe quel tissu. On dénature la lame avec le matériel génétique et les sondes puis il y a hybridation des sondes spécifiques du gène en question (locus spécifique) sur l'ADN simple brin (en parallèle on contrôle les conditions dénaturantes et la température).  [...]

[Biologie Moléculaire] Rflp

La technique southern, tu recherche une séquence spécifique, tu utilise une sonde complémentaire (marquée), si tu as ta sequence dans le fragment que tu possède, il y aura hybridation de la sonde.  [...] Par contre pour révéler les fragment de RFLP on peut également utiliser la technique du southern par hybridation des fragment d'adn avec des sondes. Est ce que c'est bien ça.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 12

En fait on utilise beaucoup cette technique pour étudier la réplication de l'ADN en visualisant les origines de réplication. Tu étires ton DNA sur une lame, ensuite tu fais une première hybridation avec un analogue du BrDU (le iodoDu par exemple) marqué en vert, pui dans un second temps tu marques avec un deuxième analogue différent (Chloro DU) lui marqué en rouge.  [...] En fait ce que tu vas voir (si ça fonctionne parce que c'est quand même relativement lourd et complexe comme technique), c'est. au centre un GAP noir (le tout début de la réplication dans lequel il n'y avait pas de marqueur rouge ou vert), ensuite tu vas voir 2 traits verts de part et d'autre du GAP (car la réplication est la plupart du temps bidirectionelle), puis 1 traits rouge derrière chaque traits verts ce qui correspondra au segment d'ADN répliqués pendant l'incubation avec le chloro DU marqué en rouge.  [...]

[Biologie Moléculaire] Adn...

Si deux brins presque complémentaires (juste une petite fraction de leur séquence ne remplit pas cette condition de complémentarité), le réappariement se fera également mais dans des conditions un peu moins strictes. L'appariemment entre deux brins qui ne proviennent pas de la même double hélice est l'hybridation entre ADN différents.  [...] Les hybridations ADN-ADN étaient une technique qui faisaient fureur dans les années 70-80 pour distinguer les espèces bactériennes. On prenait l'ADN de 2 bactéries et on essayait d'apparier les brins ensemble pour voir si elles étaient de la même espèce ou non, et si l'hybridation était imparfaite on étudiat les différences selon leur % d'hybridation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

Pour cela nous allons suivre un procédé décrit par Bento Soares en 1994, la normalisation des banques d'ADNc par cinétique d'hybridation. (5). Cette technique se base sur le fait que, plus un ADN déterminé est présent dans une population d'ADN et plus rapidement, après dénaturation il sera ren aturé.  [...] La mise en place de cette technique nécessite l'obtention d'ADNc simple brin. Pour cela, nous transformerons des bactéries compétentes avec notre banque d'ADNc. Ensuite, nous surinfecterons ces bactéries par le phage à ADN simple brin M13K07. Nos plasmides d'ADNc contiennent l'origine de réplication de ce phage, donc, quand il se répliquera (en ADN simple brin) nos plasmides d'ADNc seront eux aussi répliqués en ADN simples brins.  [...]