• Forum - Gamme, Standard, ADN, échantillon

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Théoriquement en utilisant une gamme standard avec des quantités connues d'ADN tu peux tout à fait exprimer tes résultats en ng d'ADN dans ton échantillon, ce que l'on appelle de la quantification absolule.  [...] 2. D'où 2ème problème. il peut arriver que l'efficacité de la PCR soit différente entre la PCR sur la gamme standard et la PCR sur l'échantillon. Notamment si les conditions/méthodes d'extraction d'ADN sont différentes, tu peux avoir des contaminants différents qui vont influer différement sur l'efficacité de PCR, et donc l'utilisation de la gamme standard sera un peu faussée.  [...]

qPCR résultats hors gamme standard!!!

comment expliquer des valeurs de Ct de PCR en temps réel supérieures à l'unité de copie Je m'explique. dans une gamme standard une copie par µl sort à un Ct=30 mais mes échantillons sortent justement après. j'obient donc des resultats comme 0.01 copie par µl.  [...] je travaille avec un volume total de 20µl (dont 2µl d'ADNc). A l'électrophorèse, il apparait une tres belle bande d'amplification (bonne taille) mais ca sort à 35 cycles alors que une copie de cet amplicon sort, d'après ma gamme standard(efficace) à 32 cycles.  [...]

[Biologie Moléculaire] qRT-PCR

Après si vous avez un grand nombre d'échantillons à passer pour un gène donné il est admis de faire une gamme, d'en déterminer l'efficacité et d'utiliser un des points de gamme comme standard.  [...] En gros vous choissisez un point, vous l'aliquotez en un grand nombre de tubes que vous mettez à -80°C de préférence. Ensuite pour chaque run vous décongelez un des tubes et vous le déposez comme standard. Il doit ressortir exactement au même ct que précédemment (jour ou vous avez fait la gamme).  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

Avec quoi je commence pour trouver plus d'informations sur comment préparer ou commander concernant la gamme standard ou étalon (novice en PCRq) sachant que je vais utiliser les mèmes amorces du chercheur c'est plus simple, je pense.  [...] en plus il faut pour ca que. L'efficacité PCR doit être la même sur le standard ou sur les échantillons. l'efficacité (que j'appelle E dans le message précédent) ne sera pas la même dans ton standard (une seule séquence, correspondant un certain nombre de tes primers) et dans tes echantilons (plusieurs variants de séquence donc plus de fixation et d'amplification).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

D'où l'intérêt de toujours faire une gamme standard, pour s'assurer que les CT du dosage obtenu se trouve bien dans la zone de réponse linéaire (dans les mini, et les maxi, ce n'est jamais linéaire).  [...] A chaque manip, je refais toujours une gamme standard car j'ai déjà vu des variations de 2 à 3 Ct parce que la machine commençait à merdouiller au niveau de la lecture de la fluorescence, donc toujours une gamme, toujours.  [...]

[Biochimie] Dilution en cascade

Je doit réaliser une gamme étalon de la protéine standard BSA (Bovin Serum Albumin) pour doser les protéines de mes échantillons avec la méthode.  [...] Ben dans ce cas là tu prends ta solution solution mère à partir du tube précédent. C'est à dire que tu commences tout d'abord par créer ton tube 5 puis pour faire ton tube 4 tu prélèves dans le tube en l'utilisant comme solution mère puis tu complètes avec du PBS jusqu'à avoir un volume final de 100 uL.   [...]

Méthode Elisa

généralement, dans un test ELISA, plus la couleur est foncée, plus il y a d'antigène dans le puits et donc dans l'échantillon analysé.  [...] le seul rapport que je pourrais trouver est que la technique ELISa est une des techniques utilisées pour quantifier la quantité d'EPO présente dans l'échantillon analysé.  [...]

Designer des Primers

Je fais des qRT-PCR et quand je fais ma courbe de standard avec de l'ADNc, ça marche très bien. Par contre quand je fais la courbe de standard avec de l'AND génomique, ça ne marche plus du tout. Jai des R values de l'ordre de 0,70. Le probleme c'est que mon boss veut que je fasse la courbe avec de l'AND génomique, je n'arrive pas vraiment à comprendre pourquoi. Quelqu'un peut-il m'aider.  [...] Je ne suis pas en Labo donc je ne côtoie pas ses techniques tous les jours. Juste je ne pense pas que quelque chose de spécial soit à faire, si ce n'est le protocole normal. Mettre des concentrations décroissantes d'ADN génomique dans tes 9 puits (ou 10 je ne sais plus) pour faire ta courbe standard.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Comme on double la quantité d'ADN à chaque cycle, une différence d'un Ct entre 2 échantillons correspond à une différence d'un facteur 2 en quantité d'ADN cible.  [...] ] Faire une gamme par echantillon permettra de calculer l'efficacité de la PCR dans chaque echantillon sain, mais ne permettra pas de faire la quantification absolue car la quantité de cDNA correspondant au gène cible dans le tissu sain n'est pas connu.  [...]

determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

pour calculer la concentration de l'acide urique produite par minute on divisera l'absorbance par le coefficient d'extinction molaire de l'acide urique divisé par 10mn. donc on aura la concentration en mmolaire/l mn multiplié par le volume de l'échantillon.  [...] en parallele je calcul la quantité de protéine présente dans l'échantillon par le bradford (BSA comme standard).  [...]