• Forum - Gamme, Quantité, Anticorps

[Biochimie] Quantifier un western blot

le film a une gamme de réponse linéaire, le substrat aussi, la quantité d'anticorps joue aussi un rôle. C'est pour cela que l'idéal est d'avoir une gamme de quantité sur le même gel, et sur la même expo de la même protéine, pour t'assurer que tes conditions sont bien quantitatives.  [...] Bien sur cela est hyper exigeant. Donc on peut mettre au point ses conditions quantitatives en testant une gamme avec une certaines quantité d'anticorps, un certains temps d'expo, etc... L'expérimentateur devant alors utiliser ces mêmes conditions pour les manip avec les échantillons test.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dosage protéines dans du glycérol ?

Est-ce que tu as vraiment besoin de doser ton anticorps Si c'est pour faire un western, tu peux toujours faire une gamme avec plusieurs volumes d'anticorps pour avoir une idée de la quantité optimale. Ca ne va pas te donner la concentration mais tu pourras toujours faire des belles choses avec.  [...] Tu peux diluer tes échantillons pour diminuer la concentration de glycérol. Le pb, c'est que tes anticorps seront aussi dilués, donc il ne faut pas trop diluer. Pour ta gamme, fait la dans les mêmes conditions, c'est à dire avec les mêmes concentrations d'anticorps.  [...]

[Biotechnologie] microtitration GFP

j'aimerai savoir comment fonctionne la détection de la GFP par microtitration Quels sont les anticorps qui interviennent.  [...] Je ne suis pas sur que tu fasses intervenir des anticorps. C'est selon moi une quantification de la fluorescence de la GFP à l'aide d'une gamme de dilution.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Ce raisonnement n'est valable que si la gamme a été effectué par des dilutions de raison 2, ton Efficacité traduit la différence de quantité d'échantillon entre chaque point de gamme. Donc si tu as réalisée une gamme de raison 4 tu aurais obtenu E=4.  [...] J'ai confondu avec la différence de quantité relative d'un point de la gamme à l'autre qui elle, en toute logique, doit correspondre au facteur de dilution si ton efficacité est bien de deux.  [...]

[Biochimie] Calcul de quantité de proteine

Voilà j'ai un doute concernant un calcul. En faite je fais une gamme de proteine qui me permet de calculer les proteines totales presentes dans mes essais. Cette gamme est en mg/mL. Ensuite je fais une autre manip qui me permet de connaitre la quantité d'une proteine specifique.  [...] La gamme de cette proteine specifique est en ng/mL. Or au final je veux une quantité en ng de cette proteine par mg de proteine totale. Dc je divise ma quantité en ng de proteine specifique par ma quantité en mg de prot totale. Est ce que le raisonnement est bon.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

Moi je rajouterai juste une RNASe et DNAse à ton échantillon pour me débarassé de l'ADN et l'ARN. Si tu veux garder l'activité beta-gal il ne vaux mieux pas la précipiter sinon ca risque d'etre difficile.   [...] Je ne connais pas ma quantité de protéine dois-je réaliser une gamme étalon pour déterminer les quantité de protéines de mes solutions.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

..). Pour cela, on construit une gamme de dilutions connues, et on regarde le signal que cela donne. Ensuite, on représente le Ct en fonction de la quantité d'ADN initiale (relative ou absolue), ce qui donne une droite dont la pente est proportionnelle à l'efficacité de l'amplification ( rendement ).  [...] Sous reserve que votre quantité de matériel de départ est la même pour les deux échantillons, on peut effectivement comparer le niveau d'expression de la cible dans ces deux échantillons. Pour cela, pas besoin de la gamme, on compare le Ct de chaque échantillon à concentration identique, en prenant en compte l'efficacité de l'amplification.  [...]

[Biologie Moléculaire] Encore de la Q-PCR : quantification absolue maintenant

Ma question aujourd'hui est la suivante. je souhaiterais faire une quantification absolue de mon transcrits d'intérêt pour cela j'ai compris qu'on utilisait la gamme de dilution et les Ct mais j'arrive pas à voir comment on peut revenir à une quantification de transcrits puisque pour la gamme on ne connait que la quantité total d'ARN et pas celle du transcrit.  [...] Mais je vois pas comment je peux connaitre dans ma gamme la quantité de mon transcript, je peux juste connaitre la quantité d'ARN tot.  [...]

Quel test statistique utiliser?

Je voudrais comparer le niveau d'expression d'une protéine entre des cellules transfectées et non transfectées. Pour cela j'ai réalisé un lysat cellulaire et fait migré mes protéines pour détecter ma protéine d'intérêt. J'ai par la suite quantifie l'intensité des bandes.  [...] Ok Merci. Mais du coup puis - je quand même comparer (par ex. pendant la transfection, le niveau de protéine augmente même si j'ai aucun idée de la significativité ).   [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et témoin négatif

En général non, mais tout dépend de la taille de la bande. Ca peut être les amorces, des dimères d'amorces, voire de la matrice, s'il y en avait beaucoup. Une petite photo du gel pourrait aider.   [...] Mais cette méthode n'est que tres approximative. L'idéal serait de faire une gamme d'une quantité connue et de comparer.  [...]