• Forum - Gamme, Quantité, ADN

[Biologie Moléculaire] Pcr

La PCR en temps réel est une PCR où on suit l'amplification d'ADN en temps réel, point. Le fait de déterminer la quantité intiale n'est qu'un bonus, une possibilité qu'elle offre mais qui n'est pas obligatoire.  [...] Si on passe une gamme d'ADN, ie une série de puits dont on connait la quantité d'ADN mise dans chacun, on pourra établir une droite reliant la quantité d'ADN et le Ct (principe d'amplification de la PCR, cf wikipedia si des doutes là dessus). Ainsi en connaissant le Ct d'un échantillon, on pourra estimer la quantité d'ADN initiale. Et ça c'est une qPCR en Temps Réel.  [...]

[Biologie Moléculaire] demande d'aide sur la PCR HRM

c'est exactement mon problème, quand je teste mes amorces sur l'ADN pure des souches de Leishmania ça marche très bien mais dés que je fais une autre HRM avec ces mm amorces Avec les ADNs extraits à partir de l'animal réservoir, j'obtiens toujours des Cp qui sont très élevées, et du coup le logiciel les prends comme des négatifs.  [...] Quelle quantité d'ADN avez vous par réaction Avez vous testé en gamme Pour info, 1ng/µL pour de l'ADN pur c'est beaucoup. Vous pourriez diviser par 1000 et avoir toujours du signal.  [...]

PCR et RT-PCR

Pour la différence entre PCR et PCR quantitative, la différence, c'est la quantification de ton ADN produit, par spectrométrie par exemple.  [...] Dans la PCR quantitative, on va quantifier la quantité d'ADN présent dans un échantillon X en comparant l'intensité de la fluorescence émise par l'échantillon pendant l'amplification aux intensités d'une gamme d'ADN dont on connaît les quantités, amplifiés en parallèle.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Théoriquement en utilisant une gamme standard avec des quantités connues d'ADN tu peux tout à fait exprimer tes résultats en ng d'ADN dans ton échantillon, ce que l'on appelle de la quantification absolule.  [...] La Q PCR c'est établir une gamme étalon d'un ADN controle ( Quantité d'ADN au départ connu) généralement un plasmide avec 1000, 10 000 100 000 et enfin 1 000 000 copies et définir pour chaque quantitées le nombre de cycle néssaires pour avoir un signal différent du bruit de fond (le cT) celui-ci est donc inversement proportionnelle à la quantitée d'ADN du départ.  [...]

Housekeeping gene (gene de ménage)

À votre place j'etalonnerai avec une gamme obtenue avec des quantités décroissantes d'ADN extrait d'une quantité de cellules connue (pour avoir une quantification en nombre de cellules).  [...] Pour éviter cela, et vu que vous vous intéressez à la quantité de cellules, je propose de mesurer une quantité d'ADN génomique, qui ne varie pas et est toujours proportionnelle à la quantité de cellules (sauf exception). En mesurant n'importe quelle cible dans l'ADN génomique, on peut remonter a la quantité de génomes, et donc de cellules.  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

quantité analysable d'ADN (environ 0,1 microgramme). Chaque cycle voit théoriquement doubler la quantité d'ADN présente au cours du cycle.  [...] la réaction d'amplification peut se réduire à une copie unique. La quantité maximale ne peut en aucun cas excéder 2 ¼g. En général, les quantités utilisées se situent dans une gamme comprise entre 10 et 500 ng d'ADN matriciel.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

La solution universelle est de faire une gamme d'ADN génomique. le génome haploïde comporte un exemplaire de chaque gène, i.e. 1 copie. Si tu connais la masse d'un génome haploïde (j'ai trouvé une publi avec la masse d'un centaine de génome végétaux par cytométrie en flux), tu peux calculer le nombre de génomes haploïdes contenus dans une quantité donnée d'ADN génomique, c'est à dire le nombre d'exemplaire de chaque gène. 1 équivalent-génome = 1 copie du gène.  [...] Par contre, il faudra peut être que tu rapportes tes Ct à la quantité de RT (ou d'ARN total initial) dans certains cas. Car parfois, il faut diluer beaucoup pour avoir un Ct correct, c'est-à-dire non saturé et hors du bruit de fond. En gros, je gardais les Ct entre 20 et 35 (mais j'avais ma gamme d'ADNg pour me guider).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel (qPCR)

Théoriquement si tu crées une gamme étalon, le graphe indiquant la relation entre ta quantité d'ADN et le Ct sera de ce type.  [...] De plus on ne calcule pas l'augmentation de la quantité d'ADN dans le tube, on calcules le nombre de cycles théoriques qu'il faut pour avoir X quantité d'ADN, qui équivaut à une quantité Z d'ADN initiale, ce qui est légèrement différent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Ce raisonnement n'est valable que si la gamme a été effectué par des dilutions de raison 2, ton Efficacité traduit la différence de quantité d'échantillon entre chaque point de gamme. Donc si tu as réalisée une gamme de raison 4 tu aurais obtenu E=4.  [...] J'ai confondu avec la différence de quantité relative d'un point de la gamme à l'autre qui elle, en toute logique, doit correspondre au facteur de dilution si ton efficacité est bien de deux.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel, (chimie Taqman)

et pour déterminer l'efficacité des amorces je fait une gamme des dilutions au 1/25eme,donc est ce que ce juste de trouver une différence de Ct entre 4 et 5 cycles entre chaque 2 points (1/25 et 1/625 par exemple) ou svp comment faire.  [...] mais pour moi j'utilise une gamme de dilution au 1/25eme. -1- -1/25 - -1/625- -1/5625- et 1/39625 mais le problème je n'obtient rien (cad pas de Cp) pour les dilutions -1/5625- et 1/39625 qui peut etre due à la quantité d'ADN, trés faible, donc pour tester l'efficacité de mes Primers est ce que je peut faire une autre gamme de dilution (plus faible) est d'après vous laquelle (dilution au 1/4eme ou laquelle...) que ce que tu pense,  [...]