• Forum - Gamme, Concentration, échantillon

Test ELISA

J'ai réalisé un test ELISA en TP afin de déterminer la concentration d'une protéine dans un échantillon. Afin que ce test soit quantitatif, j'ai réalisé une gamme de concentration. Après mesure de l'absorbance, j'obtiens des résultats aberrants qui ne sont pas interprétables (à la fois pour ma gamme de concentration et pour mon échantillon).  [...] C'est difficile de dire ça à priori pour les échantillons que tu testes vu que t'es pas sensé connaître la concentration, mais si ta gamme à foirée il y a un souci technique, qui peut venir de plein de choses différentes. coating mal réalisé, dilution ratées (en général pour la gamme on fait des dilutions 1/2 en cascade donc pour se planter faut quand même y mettre du sien.  [...]

[Immunologie] [Immuno]Technique RIA ou Dosage Radioimmunologique

Dans le puits il y a un anticorps contre ta molécule (ex insuline). Tu incubes ton echantillon dessus puis tu ajoutes de l'insuline marquée. Il va se créer un équilibre entre les molécules marquées et non marquées. En dosant la radioactivité du surnageant tu pourras en deduire, grace à une gamme etalon, la concentration de ton echantillon.  [...] Maintenant pour la valence oui un anticorps a 2 paratopes mais une façon de le prouver est à partir d'une représentation de Scatchard où on peut à la fois trouver la constante d'affinité.   [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

La comparaison de l'intensité des bandes en BEt ou en SYBRSafe donne de bons résultats, à un facteur 2 près... Il faut avoir un standard, n'importe quel plasmide linéarisé dont la concentration est connue fait l'affaire. Il est prudent de faire une gamme de dilution du standard (entre 10ng et 500 ng) pour évaluer plus finement la concentration de l'échantillon.  [...] Pour déterminer ces concentrations, je me suis tout le temps basé sur les resultat donné par le nanodrop. Comme la suite de mes manips ont fonctionné c'est que mes calcul pour avoir les même concentration des différent fragment était bon et que mon dosage nanodrop aussi était le bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

Ensuite, courbe d'amplification. votre signal décolle a partir d'un certain cycle, jusqu'a atteindre un plateau (pas important). Le moment ou le signal de chaque échantillon décolle, le Ct, est directement lié à la quantité d'ADN initiale. C'est d'ailleurs ce qui permet de le quantifier.  [...] Sous reserve que votre quantité de matériel de départ est la même pour les deux échantillons, on peut effectivement comparer le niveau d'expression de la cible dans ces deux échantillons. Pour cela, pas besoin de la gamme, on compare le Ct de chaque échantillon à concentration identique, en prenant en compte l'efficacité de l'amplification.  [...]

différence entre la PCR quantitative relative et absolue?

Dans certains articles sur le web, ils parlent de PCR en temps réel semi quantitative Est ce la même chose que la PCR quantitative relative.   [...] Rapidement, je dirai que la PCR quantitative relative, c'est estime des variations d'un messager d'interet par rapport a un messager qui n'est pas cense varier au cours de l'experience (genre GAPDH). L'absolu, c'est faire une PCR sur une gamme de concentration connue de ton gene d'interet et de le comparer a la quantite que tu as dans ton echantillon a tester.  [...]

[Biologie Moléculaire] dosage d'ADN sans spectrophotomètre

Je pense qu'il veut dire qu'il faut que la concentration de ton échantillon doit être compris dans la gamme de concentration de ton marqueur. Si elle est au dessus ou en dessous, tu ne pourras pas calculer sans être certaine du résultat.  [...] Dans tous les cas, je te conseillerais de quantifier les bandes de ton gel avec un logiciel comme ImageJ si tu veux avoir la meilleure approximation possible de ta concentration.  [...]

[Biochimie] Au secours!

I - Une gamme étalon est réalisée à partir de sérumalbumine bovine (SAB), une protéine que l'on peut purifier en grande quantité à partir de sérum de boeuf, et qui est utilisée de ce fait comme protéine de référence. On admet par conséquent qu'un échantillon protéique d'origine biologique quelconque, d'absorbance A, a la même concentration en protéines qu'un échantillon de SAB traité dans les mêmes conditions et ayant la même absorbance A.  [...] La solution mère de SAB a pour concentration initiale C0 = 1 mg.mL-1*. une fraction aliquote de cette solution est diluée au 1/10è pour réaliser la gamme étalon sur la base des concentrations suivantes. 25 / 50 / 75 / et 100 µg.mL-1. Après addition du réactif de Bradford, les absorbances suivantes sont obtenues.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Tu dis avoir fait une régression avec le résultat de tes échantillons...qui devaient être des contrôles avec des concentrations d'ADNc connus afin de réaliser une gamme et de venir placer le résultats de ton échantillons test dessus, n'est ce pas.  [...] Dans le cas d'une quantification dite relative où n'est pas utilisée une gamme de cDNA, le calcule des quantités de cDNA peut alors être 2^-Ct si E=2 (une dilution de raison 2 des échantillons est alors réalisée, mais sans connaissance de la concentration de cDNA cible dans ce même échantillon).  [...]

[Physiologie] Protocole experimentale

2.Pour caracteriser la nature du ligand on fait une gamme concentration croissante et cumulative d'adrenaline puis une gamme de la molécule puis de nouveau de l'adrenaline. Sachant que l'adrenaline agit preferentiellement sur les récepteurs beta on peut comparer l'effet induit par la molécule.  [...] 3.Concernant la selectivite je propose d'inhiber le récepteur beta 1 puis faire une gamme concentration croissante et cumulative d'adrenaline puis inhiber beta 2 refaire une gamme faire des courbe concentration croissante et calculer les CE50 et comparer les effets max.  [...]

comment calculer EC50 de mélange de deux substances chimiques?

En fait je fais des études sur l'effet toxique de deux métaux. en premier lieu j'ai fait testé la dose réponse de chaque métal seul et j'ai calculé les ec50 de chaqu'un. et après j'ai fait une gamme croissante des concentration des deux métaux en mélange (EC5A+EC5B. EC10A+EC10B... EC50A+EC50B).  [...] Donc au début j'ai exposé les palourdes à une gamme croissanté de cadmium seeul et une gamme croissante de concentration de cuivre seul pour voir l'effet dose réponse et déterminer le EC50.  [...]