• Forum - Gamme, ADN, ARN

Normalisation RT-PCR quantitative

Mais le problème de la méthode des delta delta de Ct, est que c'est de la quantification relative, i.e. mon gène est n fois plus/moins exprimé que tel autre. Si tu veux faire de la quantification absolue, il te faut faire une gamme-étalon avec des quantités connues d'ADN et comparer le Ct de ton gène cible avec les Ct de la gamme.  [...] En construisant ta gamme-étalon avec de l'ADN génomique, tu as la même référence pour étudier tous tes gènes. Tu peux même concevoir un couple d'amorces qui amplifie une partie d'ADN non codant pour vérifier que tes prep' d'ARN ne contiennent pas trop d'ADN génomique.  [...]

Apparition de l'ADN

Ca fait toujours plaisir. Je ne suis certes, qu'un petit étudiant mais je pense quand même avoir quelques idées sur l'ADN et l'ARN. Et pour cause, je n'ai jamais écrit que l'ARN était de l'ADN avec des U comme tu dis. N'empêche que c'est quand même la présence d'uracile dans l'ARN qui permet d'affirmer qu'on a à faire à de l'ARN et pas à de l'ADN, ça reste un argument, non.  [...] Ce que j'ai voulu dire, c'est que avec cette déamination, tu obtients un code à 3 lettres pour l'ARN et à 4 lettres pour l'ADN. Et je pense que tu ne me contrediras pas lorsque je dis que tu peux former une gamme plus large de molécules avec 4 lettres plutôt qu'avec 3, car les possibilités de séquences différentes sont plus importantes avec 4 lettres qu'avec 3.  [...]

[Biologie Moléculaire] Encore de la Q-PCR : quantification absolue maintenant

Ma question aujourd'hui est la suivante. je souhaiterais faire une quantification absolue de mon transcrits d'intérêt pour cela j'ai compris qu'on utilisait la gamme de dilution et les Ct mais j'arrive pas à voir comment on peut revenir à une quantification de transcrits puisque pour la gamme on ne connait que la quantité total d'ARN et pas celle du transcrit.  [...] Mais je vois pas comment je peux connaitre dans ma gamme la quantité de mon transcript, je peux juste connaitre la quantité d'ARN tot.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage des ARN à l'orcinol

Pourquoi le ration purine/pyrimidine serait il de 1 dans les ARN Ceci ne vaut que pour l'ADN double brin. Il faudrait retrouver le tableau avec les %CG en fonction des organismes (je l'ai pas retrouvé en cherchouillant vite fait sur le net). Maintenant il faut aussi tenir compte du fait que le dosage spectro n'est pas une méthode de dosage absolument précise avec les appareils classiques.  [...] Donc, j'ai une remarque à faire. ta gamme étalon, si tu l'a faite avec l'ARN commerciale de levure, il n'y a pas de différence dans le rapprot C G, ton absorbance est proportionnelle à ta concentration. Il y aurait un soucis seulement si l'ARN de ta gamme vient d'une espèce différente de la levure dont tu doses l'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

1. Il faut que l'appareil utilisé pour quantifier l'ADN ayant servis à faire la gamme étalon soit extrémement précis, sinon tu feras de la quantification absolue, par rapport à une référence fausse. Donc la précision de ta quantif en qPCR dépendra de la précision de ton étalon.  [...] La Q PCR c'est établir une gamme étalon d'un ADN controle ( Quantité d'ADN au départ connu) généralement un plasmide avec 1000, 10 000 100 000 et enfin 1 000 000 copies et définir pour chaque quantitées le nombre de cycle néssaires pour avoir un signal différent du bruit de fond (le cT) celui-ci est donc inversement proportionnelle à la quantitée d'ADN du départ.  [...]

[Biologie Moléculaire] Urgent: préparer gamme pr qRT-PCR

Je veux faire une qRT-PCR, pour tester mes primers que j'utilise pour la 1ère fois, on m'a dit qu'il faut que je réalise une gamme de mes cDNA. Ma collègue partait d'un échantillon à 2,1 µg d'ARN total, après la RT elle commence par diluer les cDNA au 1/4 puis au 1/10, 1/50, 1/100, 1/150.  [...] Mon échantillon est moins concentré en ARN ~0,6 µg (échantillons rares), donc je me dis que je devrais le diluer au 1/2 puis faire ma gamme, est-ce suffisant j'ai besoin de vos conseils car comme je l'ai dit les échantillons sont rares et je voudrais pas rater cette manip,  [...]

L'ARN et l'origine de la vie...

Comme la dit Yoyo, l'existence des DNAzymes indique que l'existence des ribozymes n'est plus un argument fort supportant l'hypothèse du monde ARN. Domage que les bouquins de vulgarisation sur le sujet soit à la traine.  [...] Il faut préciser que beaucoup de recherches portent sur la mutation aléatoire de séquences d'ARN à activité catalytique, ce qui a permis d'obtenir toute une gamme d' enzymes ARN catalysant diverses réactions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

En effet j'ai fait une gamme d'étalonnage (avec différentes dilutions de l'ADN de champignon) qui m'a servie pour ma régression linéaire, j'ai ensuite estimé la Concentration en ADN de champignon des échantillons. Les amorces sont bien spécifiques de la séquence à amplifier et j'ai réaliser 3 répétition de témoin eau.  [...] Ce raisonnement n'est valable que si la gamme a été effectué par des dilutions de raison 2, ton Efficacité traduit la différence de quantité d'échantillon entre chaque point de gamme. Donc si tu as réalisée une gamme de raison 4 tu aurais obtenu E=4.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantification absolue / gamme étalon

J'utilise la PCR quantitative, quantification absolue avec une gamme étalon obtenue par dilution de quantités connues d'ADN. Je cherche à déterminer les quantités d'ADN d'échantillons. Je travaille en SYBR Green. Mon efficacité de PCR et la spécificité de mes amorces sont OK.  [...] Il se peut en effet que mon efficacité de PCR soit différente pour la gamme étalon et pour l'échantillon.. L'ADN est extrait de bactéries et ces bactéries sont dans des matrices différentes pour la gamme étalon et pour l'échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] demande d'aide sur la PCR HRM

c'est exactement mon problème, quand je teste mes amorces sur l'ADN pure des souches de Leishmania ça marche très bien mais dés que je fais une autre HRM avec ces mm amorces Avec les ADNs extraits à partir de l'animal réservoir, j'obtiens toujours des Cp qui sont très élevées, et du coup le logiciel les prends comme des négatifs.  [...] Quelle quantité d'ADN avez vous par réaction Avez vous testé en gamme Pour info, 1ng/µL pour de l'ADN pur c'est beaucoup. Vous pourriez diviser par 1000 et avoir toujours du signal.  [...]